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背景介绍:嗜酸性粒细胞是乳腺癌等实体瘤中的一种常见免疫细胞,但它们的抗肿瘤免疫效应存在多面性。最近,免疫检查点抑制剂的临床实验结果提示外周血嗜酸性粒细胞的增多与较好的临床疗效相关。目的:研究嗜酸性粒细胞在乳腺癌CTLA4抗体治疗中的作用及其机制。方法:通过建立EO771和MCaP0008乳腺癌模型,(1)进行CTLA抗体治疗,监测肿瘤生长,比较不同乳腺癌对CTLA4抗体治疗的敏感性;(2)分析肿瘤浸润免疫细胞与CTLA4抗体治疗敏感性之间的关系;(3)在EO771乳腺癌模型中,利用SiglecF抗体去除小鼠体内的嗜酸性粒细胞,分析嗜酸性粒细胞对CTLA4抗体抑癌作用的影响;(4)研究嗜酸性粒细胞在CTLA4抗体治疗诱导的肿瘤血管正常化中的作用;(5)构建高表达CCL24的EO771肿瘤细胞系EO771-CCL24,从肿瘤生长、肿瘤免疫细胞组成、血管密度及功能方面分析CCL24及嗜酸性粒细胞增加对CTLA4抗体治疗的影响;(6)分析EO771-CCL24肿瘤模型中肿瘤浸润嗜酸性粒细胞与肿瘤生长、肿瘤血管之间的关系;(7)在EO771-CCL24肿瘤模型中分析CCL24的高表达对免疫反应和肿瘤血管生成相关基因表达的影响;(8)通过体外实验分析细胞因子CCL24对乳腺肿瘤细胞增殖与凋亡、HUVEC内皮细胞管状形态形成的影响。结果:CTLA4抗体治疗抑制了EO771肿瘤的生长和诱导了肿瘤血管正常化,但对MCaP0008肿瘤模型无上述作用;CTLA4抗体治疗在EO771肿瘤模型而不是MCaP0008模型中增加了肿瘤浸润的嗜酸性粒细胞;在EO771肿瘤模型中,体内去除嗜酸性粒细胞可部分逆转CTLA4抗体治疗对肿瘤生长的抑制作用和完全逆转了CTLA4抗体治疗对肿瘤血管的作用;在EO771肿瘤模型中,高表达CCL24促进了嗜酸性粒细胞的肿瘤浸润,但削弱了CTLA4抗体治疗的抗肿瘤作用;高表达CCL24增加了肿瘤血管的密度和抑制了血管功能;高表达CCL24减少了肿瘤浸润的CD8~+T淋巴细胞和降低了肿瘤组织中IFNγ和CXCL9的基因表达水平;高表达CCL24促进了EO771肿瘤细胞的增殖和抑制了其凋亡;CCL24细胞因子不直接影响HUVEC细胞管状形态的形成。结论:在乳腺肿瘤模型中,CTLA4抗体治疗促进的嗜酸性粒细胞肿瘤浸润与其疗效呈正相关;CTLA4抗体治疗通过增加嗜酸性粒细胞的肿瘤浸润来诱导肿瘤血管正常化;高表达CCL24提高了肿瘤浸润的嗜酸性粒细胞,降低了IFN-γ和CXCL9基因的表达,促进了肿瘤血管的非正常化和削弱了CTLA4抗体的治疗效果。这些结果提示,在不同的肿瘤微环境下,嗜酸性粒细胞可能促进肿瘤血管的正常化或不正常化,从而对免疫检查点抑制剂治疗产生不同的影响。