论文部分内容阅读
第一部分儿童ALL微小残留病的动态监测及其意义目的探讨动态监测微小残留病(MRD)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)治疗中的预后价值。方法ALL病儿75例,在诱导缓解治疗第19、33天及维持治疗过程中通过流式细胞术检测MRD水平,根据MRD水平分为A组(MRD≤10-4)、B组(MRD介于A组与C组间)、C组(MRD≥10-2),采用Kaplan-Meier分析法及COX比例风险回归模型对实验结果进行分析。结果1.诱导缓解治疗第19天,A组生存率明显高于B、C组(x2=6.435、19.795,P<0.05)；诱导缓解治疗第33天,C组病儿的生存率显著低于其他两组(x2=5.057、8.346,P<0.05)。2.维持治疗3个月、6个月、12个月、2年时MRD不同水平,生存期差异有显著性(x2=6.133-22.558,P<0.05)；治疗第3年时MRD的水平对病儿生存率无影响(P>0.05)。根据维持治疗过程中MRD≥10-2出现在不同时间点分3组：半年内出现(Ⅰ组)、半年到1年出现(Ⅱ组)、1年后出现(Ⅲ组),Ⅲ组的生存率高于Ⅰ、Ⅱ组(x2=6.226、7.018,P<0.05)。3.在治疗1年内出现MRD≥10-2的病儿,高危组、T细胞型、融合基因阳性的生存率显著降低(x2=5.661～10.682,P<0.05)。4.多因素分析：诱导缓解治疗第19天MRD水平是影响病儿预后的独立危险因素(RR=4.01;95%CI0.968～8.995, P<0.05).治疗1年内出现MRD≥10-2的病儿,高危组(RR4.73;95%CI1.316-14.624, P<0.05)、T细胞型(RR1.78;95%CI0.101～6.014, P<0.05)、融合基因阳性(RR0.08;95%CI0.008～0.801, P<0.05)是影响病儿预后的危险因素。结论动态监测MRD对病儿预后有极大临床指导意义,有助于实施个体化治疗。第二部分左旋门冬酰胺酶抑制白血病细胞增殖的体内外研究目的探究L-ASP对Jurkat细胞株增殖的影响及其体内外对白血病细胞周期的影响。方法体外培养的Jurkat细胞株,取处于对数生长期且生长状态良好的细胞用L-ASP进行干预。不同浓度L-ASP (0.2U/ml、1U/ml、5U/ml)分别处理Jurkat细胞24h、48h、72h后,Jurkat细胞的增殖抑制作用采用CCK-8法检测,流式细胞术检测细胞周期的阻滞作用。取ALL病儿新鲜骨髓液3～5ml,提取单个核细胞,按照细胞周期试剂盒的要求处理实验所需细胞,流式细胞术检测L-ASP对体内白血病细胞周期的阻滞作用。结果1.不同浓度(0.2U/ml、1.0U/ml、5.0U/ml) L-ASP分别作用Jurkat细胞24h、48h、72h后,各个处理组之间的细胞抑制率差异有显著性(P<0.05)。单因素方差分析示：在L-ASP浓度不变的情况下,L-ASP分别作用Jurkat细胞24h、48h、72h,抑制率逐渐升高(P<0.05)；当作用时间不变时,L-ASP的浓度越高,细胞抑制率越高(P<0.05)。2.不同浓度的L-ASP (0.2U/ml、1.0U/ml、5U/ml)处理Jurkat细胞24h,G1期细胞所占比例各组间比较有差异(P<0.05)。当L-ASP浓度为0.2U/ml处理细胞24h时,LSD-t检验,G1期细胞所占比例与对照组比较无差异(P>0.05),L-ASP为0.2U/ml处理细胞48h、72h时,G1期细胞所占比例与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度的L-ASP (0.2U/ml、1.0U/ml、5U/ml)处理Jurkat细胞48h,G1期细胞所占比例各组间以及各组与对照组之间的差异有显著性(P<0.05)。不同浓度的L-ASP (0.2U/ml、1.0/ml、5U/ml)处理Jurkat细胞72h, L-ASP对Jurkat细胞周期的阻滞作用明显,各组间以及各组与对照组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。0.2U/ml的L-ASP作用Jurkat细胞不同时间(24h、48h、72h),各组间G1期细胞所占比例有差异(P<0.05)。1.0U/ml的L-ASP作用Jurkat细胞不同时间,随着作用时间延长,G1期细胞所占比例升高,(P<0.05)。5.0U/ml的L-ASP作用Jurkat细胞不同时间,L-ASP对Jurkat细胞周期的阻滞作用随着作用时间的延长越来越明显(P<0.05)。3.ALL病儿新发组骨髓细胞G1期所占比例为(75.223±2.085)%,诱导治疗33天组骨髓细胞G1期所占比例为(89.106±3.250)%,t检验结果：新发组和诱导缓解治疗第33天组G1期细胞比例差异有统计学意义(P<0.01)。诱导缓解治疗第33天时G1期细胞比例与MRD的水平呈负相关性(r=-0.867,P<0.01)。结论在体内外L-ASP均可抑制白血病细胞的增殖,并将细胞阻滞在G1期。ALL病儿诱导缓解治疗第33天时G1期细胞比例与MRD水平可能呈负相关性。