目的探讨知母皂苷B-Ⅱ（Timosaponin B-Ⅱ,TB-Ⅱ）通过介导丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases,MAPKs）和核转录因子κB（Nuclear factor-κappa B,NF-κB）通路对白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）刺激的SW1353细胞和原代大鼠软骨细胞的抗骨关节炎（Osteoarthritis,OA）作用及其机制,为临床OA非手术治疗提供新的思路及理论基础。方法1.我们通过CCK-8比色法测定不同浓度TB-Ⅱ对SW1353细胞和大鼠软骨细胞细胞活力的影响,对TB-Ⅱ的浓度进行筛选。然后将细胞分组进行实验:对照组（正常培养）;IL-1β（10 ng/mL处理24h）组;IL-1β+TB-Ⅱ处理组（低剂量和高剂量）,即分别用TB-Ⅱ（20和40μg/mL）和TB-Ⅱ（10和30μg/mL）预处理SW1353细胞和软骨细胞24h,再用IL-1β（10 ng/mL）刺激24 h。随后收集细胞,CCK8比色法检测四组细胞活力,流式细胞仪检测细胞内活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平。2.q RT-PCR和western blot检测氧化标记物诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase,i NOS）和环氧合酶-2（Cyclooxygenase 2,COX-2）,以及基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）（MMP-1、MMP-3和MMP-13）。3.ELISA检测四组细胞上清中的一氧化氮（Nitric oxide,NO）、前列腺素E2（Prostaglandin E2,PGE2）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factorα,TNF-α）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）和单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte chemotactic protein-1,MCP-1）。4.为探讨TB-Ⅱ抗OA的分子机制,使用western blot检测了四组细胞中MAPKs和NF-κB信号转导通路中ERK1/2、p38、JNK和p65的磷酸化水平,并同时进行了细胞免疫荧光染色检测了p65在细胞的核转位情况。结果1.IL-1β刺激SW1353细胞和大鼠软骨细胞后ROS水平上升;i NOS,COX-2,MMP-1,MMP-3和MMP-13的m RNA和蛋白表达均增高;NO,PGE2,TNF-α,IL-6和MCP-1的浓度均增高;与IL-1β组相比,IL-1β+TB-Ⅱ组的ROS水平降低,i NOS,COX-2,MMP-1,MMP-3和MMP-13的m RNA和蛋白表达均降低;NO,PGE2,TNF-α,IL-6和MCP-1的浓度均降低。2.IL-1β刺激SW1353细胞和大鼠软骨细胞后MAPKs和NF-κB信号通路中的p-p65、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK的蛋白表达均显著增加;与IL-1β组相比,IL-1β+TB-Ⅱ组p-p65、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK的蛋白表达均显著降低;TB-Ⅱ（40μg/mL）抑制了IL-1β处理的SW1353细胞中p65由胞浆向胞核的转位。结论TB-Ⅱ可能通过抑制MAPKs和NF-κB通路抑制IL-1β诱导的炎症、氧化应激和ECM降解,从而成为治疗OA的新型药物。