ROPGEF5在拟南芥根维管组织发育中的调控作用

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在拟南芥中,作为小G蛋白RAC/ROP上游的活化因子,ROPGEFs(Guanine Nucleotide Exchange Factor)能够催化ROPs,使其由GDP结合的非活性形式(GDP-ROPs)转化成为GTP结合的活性形式(GTP-ROPs)从而参与调节植物的生长发育和抗逆反应。拟南芥中有14个ROPGEFs家族成员,这14个基因都含有保守的Prone结构域,成员中包含ROPGEF1到ROPGEF14。现阶段关于ROPGEFs已有不少文献报道:ROPGEFs在植物生长发育中起了重要的调节作用。本论文,研究发现ROPGEF5影响拟南芥根维管的发育,获得如下结果:(1)通过基因芯片数据分析发现ROPGEF5在胚胎、幼苗、根、维管、花序分生组织、花、角果等都有表达,进一步通过ROPGEF5pro-GUS材料的GUS组织化学染色验证。而与ROGEF5同源性很近的ROPGEF1和ROPGEF6通过GUS组织化学染色后发现在根维管组织有相似的表达模式。(2)对ROPGEF5打靶突变体,ropgef5-1、ropgef5-2、ropgef5-3表型分析发现,在DIC下以及在激光共聚焦显微镜下都能发现根的维管发育有明显的缺陷,说明ROPGEF5在根维管发育中起作用。(3)以ropgef5-1为父本分别与PIN1pro-PIN1-GFP,DR5-GFP以及ARR5pro-RFP材料杂交,在激光共聚焦显微镜下观察发现,作为生长素相关marker的PIN1pro-PIN1-GFP,DR5-GFP的荧光信号强度有明显的下降,而作为细胞分裂素信号相关marker的ARR5pro-RFP则表现出荧光信号扩散。这说明在根维管发育中ROPGEF5可能通过调控激素信号起作用。(4)通过对ropgef5-2、ropgef5-3、ahp6-1和野生型(WT)进行细胞分裂素处理,ROPGEF5的突变体比野生型(WT)对细胞分裂素更敏感,表现出与细胞分裂素负调控因子AHP6的突变体相似的表型。而在根中细胞分裂素与生长素互为拮抗,这说明了ROPGEF5可能负调控细胞分裂素信号影响维管发育。(5)利用酵母双杂实验发现ROPGEF5与AHP6存在直接的相互作用,并且ROPGEF5与AHP6相互作用的区域为保守的Prone结构域。以上结果显示,ROPGEF5在根的维管发育中起重要的调控作用。
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