真菌耐药性一直是真菌病治疗的难题。抗菌肽多靶点作用机制有可能是解决真菌耐药性问题的最佳选择。抗菌肽CGA-N12和CGA-N9为衍生自嗜铬粒蛋白A(CGA)N端的抗念珠菌活性肽,CGA-N12由N端第65至76位氨基酸组成,CGA-N9由N端第47至55位氨基酸组成。前期研究结果表明,CGA-N12和CGA-N9在不破坏细胞膜完整性的情况下,诱导念珠菌细胞凋亡,但其对细胞膜结构的影响尚不清楚。本研究旨在探究CGA-N12和CGA-N9作用时念珠菌细胞膜结构的变化,丰富抗菌肽膜活性机制理论体系,并为将CGA-N12和CGA-N9开发成为新型抗真菌药物提供理论基础。本文通过使用荧光探针、原子力显微镜(AFM)、离子体原子发射光谱仪(ICP-OES)、紫外分光光度计等研究了CGA-N12和CGA-N9对热带念珠菌细胞膜电位、膜流动性、细胞膜表面结构、钾离子泄露、质膜中麦角甾醇的含量变化以及诱导脂质体通道孔径的影响。进一步,通过荧光染料钙黄绿素(calcein)和CF的泄漏情况,检测不同浓度CGA-N12和CGA-N9对膜完整性影响的变化规律及诱导形成通道的规律。结果表明,CGA-N12在热带念珠菌细胞膜中诱导产生直径小于1 nm的膜通道的形成,导致钾离子、氯离子、质子等泄漏,从而导致膜电位耗散,在不破坏膜完整性的情况下增加了膜流动性,但不影响麦角甾醇合成。CGA-N9也有相似作用。对CGA-N12和CGA-N9浓度与膜完整性的关系进行研究发现,当两种抗菌肽浓度升高到8×MIC时,在膜上诱导形成直径大于1nm的孔径,16×MIC时破坏细胞膜完整性。综述所述,抗菌肽CGA-N12和CGA-N9对细胞膜的损伤具有浓度依赖性。在低浓度条件下,不破坏细胞膜完整性,但可以在细胞膜上诱导形成小孔,造成离子泄露,破坏细胞膜极性;随着抗菌肽浓度的升高,在细胞膜上诱导生成的孔径增大,直到破坏细胞膜完整性。