【摘 要】
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生菜(Laetuca sativa L．)，菊科，葛芭属植物，是一种口感好，热量低的可生食蔬菜。生菜生产周期短，可食用部分多，组培再生效率高，操作简便，是一种表达外源蛋白的良好植物基因工程材料。
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生菜(Laetuca sativa L．)，菊科，葛芭属植物，是一种口感好，热量低的可生食蔬菜。生菜生产周期短，可食用部分多，组培再生效率高，操作简便，是一种表达外源蛋白的良好植物基因工程材料。
本实验以美国速生生菜为研究材料，研究了生菜的最佳诱导培养基、最佳暗培养时间以及愈伤组织分化和生根时潮霉素的合适的筛选浓度。美国速生生菜的最佳愈伤诱导培养基为：
MS+NAA0.3mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖3﹪+琼脂0.7﹪，最佳不定芽诱导培养基为：MS+NAA0.02mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖3﹪+琼脂0.7﹪。最佳暗培养时间为5天。愈伤组织分化时潮霉素合适的筛选浓度为35mg/L，生根时潮霉素合适的筛选浓度为30mg/L。通过农杆菌介导法将类胡萝卜素合成酶基因PSY基因导入到美国速生生菜基因组中。在进行农杆菌浸染的实验当中，对农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间、是否添加乙酰丁香酮几个影响浸染效果的因素进行了研究。研究发现农杆菌的最佳浸染浓度为OD值介于0.4到0.6之间：农杆菌的最佳浸染时间为10-15min；农杆菌与生菜子叶外植体的共培养时间以2天为最佳；酚类物质乙酰丁香酮(AS)在进行生菜的浸染时以添加100μmol/L并再培养6h为合适。在实验中得到转PSY基因潮霉素抗性苗一共5株。
通过PCR和PCR-Southern检测，初步证明目的基因PSY基因己经整合到生菜基因组中，通过检测证明，有2棵转PSY基因阳性苗。
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