马齿苋提取物对产ESBLs大肠杆菌体外抑菌作用及抑菌机理的研究

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针对动物源细菌耐药性的日愈严重,本研究旨在观察马齿苋提取物对耐药性大肠杆菌的抑菌作用,并探究其抑菌机理,为临床治疗畜禽大肠杆菌感染,以及开发新型的中药抑菌剂提供理论依据。本文对从猪病料中分离得到的大肠杆菌,采用纸片扩散法检测是否产ESBLs,并通过聚合酶链式反应检测ESBLS基因型,以及采用肉汤微量稀释法测定大肠杆菌分离株对12种常用抗菌药的敏感性。结果显示试验中分离得到的菌株含有TEM和CTX-M两种产ESBLs基因型,通过药敏试验发现该分离株对12种常见的抗菌药均有不同程度的耐药,尤其是对头孢曲松、头孢噻呋、头孢噻肟、阿米卡星、氟苯尼考和林可霉素均耐药,喹诺酮类药物次之。另外,本文观察了12种中草药水提取物对大肠杆菌的抑菌效果。其中以马齿苋对产ESBLs大肠杆菌和非产ESBLs大肠杆菌的抑菌效果最好,MIC值分别为为125 mg/mL、62.5 mg/mL,因此选择马齿苋做进一步研究。采用不同提取溶剂对马齿苋成分进行提取,并分别对马齿苋不同提取物进行药物敏感性试验,其中马齿苋乙醇提取物的抑菌效果最好,MIC值为62.5mg/mL,水提取物次之,MIC值为125mg/mL。然后测定马齿苋不同提取物与12种常见抗菌药的联合抑菌效果,结果显示6种马齿苋提取物均有不同程度的联合抑菌效果,其中以马齿苋乙酸乙酯提取物和水提取物的效果最好,乙醇提取物的效果次之。探究了马齿苋水提取物与醇提取物对产ESBLs大肠杆菌的抑菌机理。通过对大肠杆菌生长曲线的绘制,发现在马齿苋水提取物和醇提取物可以抑制大肠杆菌的对数生长期,并呈浓度依赖性。通过透射电镜观察,药物作用下的大肠杆菌细胞壁变薄,质壁分离,形成空腔。菌液碱性磷酸酶含量测定和胞外可溶性蛋白含量测定发现马齿苋水提取和醇提取物可以影响大肠杆菌细胞壁和细胞膜的结构,使细胞通透性增加。通过对胞内蛋白SDS-PAGE电泳分析发现,马齿苋水提物和醇提取物可以抑制菌体蛋白的合成。
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