桑黄是一种珍稀的药用真菌,也是收录于古书的传统中药材。国内外学者研究表明,桑黄主要有抗肿瘤、抗癌、保肝、降血糖、治疗糖尿病、抗氧化和抗炎抑菌的功效[1]。近年来,因其良好的抗癌活性备受瞩目。桑黄中的有效活性成分有多糖类、甾醇类、三萜类、黄酮类、吡喃酮类和多酚类等。虽然报道的化合物较多,但因分离纯化技术的局限,很多化合物还未获得大量制备,没有对照品。本研究为获得更多的桑黄有效化合物的对照品,对子实体和菌丝体原料进行比较,从更适合分离纯化的原料中进行有效化合物的分离制备,并建立能表征桑黄化学组成特征的指纹图谱,结合体外活性分析,研究指纹图谱和活性的相关关系,阐释桑黄的活性作用所对应的活性物质,建立桑黄的谱效关系模型,对原料进行活性的预测。本论文的研究内容主要有以下三个方面:1、桑黄菌丝体和子实体中次级代谢产物的成分及活性比较对桑黄菌丝体和子实体依次进行了石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇四次萃取,得到了四个不同的萃取相,对四个不同的萃取相进行了液相分析,比较了它们保留时间和峰面积的区别,确定了桑黄菌丝体和子实体的次级代谢产物在组成和含量上的具体区别;从抗氧化和抗肿瘤两个方面进行活性比较,从清除DPPH·自由基能力的结果来看,菌丝体和子实体均是乙酸乙酯相和正丁醇相的抗氧化活性较好,另外,菌丝体的四个萃取相清除DPPH·自由基的能力要高于子实体的四个萃取相;从清除ABTS+自由基能力的结果来看,菌丝体和子实体同样是乙酸乙酯相和正丁醇相的抗氧化活性较好。菌丝体的四个萃取相清除DPPH·自由基的能力除了石油醚相,其余三个萃取相均高于子实体的萃取相。从菌丝体和子实体抑制Hep G2和MCF-7两种肿瘤细胞生长的能力来看,菌丝体和子实体四个萃取相在较高浓度时对两种肿瘤细胞的生长均有一定的抑制作用且有剂量依赖性。与抗氧化能力相反,子实体各萃取相对Hep G2的增殖抑制率高于菌丝体。2、桑黄中次级代谢产物的分离纯化与结构鉴定桑黄次级代谢产物的分离纯化根据原材料不同分为两个部分,分别是以菌丝体和子实体为原材料进行分离纯化。首先,以菌丝体乙酸乙酯萃取相为材料进行分离纯化。对60种不同的高速逆流色谱溶剂体系进行了分析,最终确定了适合乙酸乙酯相样品的溶剂体系为正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水,并且它们的比例为2:5:2:4,1:3:1:2,2:4:1:4,4:12:5:8,1:5:2:4,4:10:4:7,4:10:4:9,8:24:7:16,4:12:5:11,8:27:10:16时K值较为适合高速逆流色谱分离,通过高速逆流色谱实验结果,最终确定比例为4:12:5:8时,分离效果最佳。通过高速逆流色谱分离富集到了71%目标峰1纯度的组分和64%纯度的目标峰2的组分。进一步通过制备液相对这两个组分就行纯化,获得6个纯品,进行液质分析和核磁分析。其次是以子实体为原材料进行的分离纯化。子实体经过80%乙醇浸提24小时后浓缩干燥,所得样品进行大直径硅胶柱分离、小直径硅胶柱分离、TLC薄层色谱分析、制备液相分离,最终获得了六个较纯的组分。经过液相分析后,有两个组分的纯度在70%-80%之间,再通过制备TLC薄层色谱进行分离,经过液相分析表明纯度达到85%以上,将获得的纯品进行核磁和液质分析,比对质谱图和核磁结果确定化合物的结构类型。3、桑黄抗肿瘤和抗氧化谱效关系研究以32个不同栽培方式获得的桑黄子实体为原材料,进行高效液相分析,将谱图通过中药指纹图谱分析软件进行处理,建立了桑黄的高效液相色谱指纹图谱。同时,对32个样品的醇提物进行清除DPPH·自由基和ABTS+自由基的能力和抑制Hep G2细胞和MCF-7细胞生长能力的体外抗氧化和抗肿瘤实验。以指纹图谱中的峰面积为自变量,抗氧化能力和抗肿瘤能力的IC50值为因变量进行回归分析,确定了它们相关关系的回归方程。为了验证模型的准确性,收集了另外七个桑黄样品作为验证组,进行高效液相分析和体外抗氧化和抗肿瘤活性实验,将这七个样品的峰面积代入回归方程所得的预测活性值与实际实验所得的活性进行比较分析,引入了相似度的概念进行分析,结果表明绘制预测值和实际值的相似度高,表明建立的模型可用于活性的预测。