论文部分内容阅读
胃癌是起源于胃粘膜上皮的恶性肿瘤,早期症状较隐匿,不易发现,由于其进展较快,很多患者确诊时已经到达晚期并发生转移,导致治疗效果和预后不佳。胃癌的发病机制一直是研究的热点,但其病理过程非常复杂,涉及到多因素的共同调控,因此,为提高胃癌的治疗效果,进一步探究胃癌的发病机制并寻求新的靶向治疗药物尤为重要。近年来大量研究证实,间隙连接蛋白43（Connexin 43,Cx43）通过介导细胞间隙连接通讯（gap junction intercellular communication,GJIC）调控着多种肿瘤的发生与转移,但关于胃癌中Cx43的作用研究较少,目前认为其低表达推动了胃癌的发生与发展。m TOR/p70S6K信号通路作为经典信号通路PI3K/AKT/m TOR的下游,其不仅调节着正常细胞的生长和代谢,也调控着肿瘤细胞的增殖和转移。研究表明,胃癌、宫颈癌、肺癌、食管癌等肿瘤的发生都与该通路的过度激活有关,并且发现在胃癌组织中,Cx43与m TOR/p70S6K信号通路可能通过相互作用共同调节着胃癌的发生与转移,但两者对胃癌细胞的作用尚未见报道,其具体机制仍需进一步深入研究。全反式维甲酸（all-trans-retinoic acid,ATRA）在调节细胞增殖分化方面效果显著,其作用已不仅仅局限于急性早幼粒白血病（acute promyelocytic leukemia,APL）的临床治疗,它在多种肿瘤中都发挥着抑制细胞增殖和迁移的生物学功能,但其对胃癌细胞的作用研究较少。研究证实,ATRA在大肠癌、前列腺癌等多种肿瘤中可以通过上调Cx43表达、恢复GJIC功能进而抑制细胞的增殖。然而,ATRA对胃癌的调控作用是否与Cx43及m TOR/p70S6K信号通路有关,尚未可知。因此,本实验用ATRA处理胃癌MGC-803细胞,研究ATRA对胃癌细胞增殖和迁移的影响,以及是否通过Cx43及m TOR/p70S6K信号通路发挥作用,为ATRA应用于胃癌的临床治疗以及Cx43成为胃癌的潜在药物作用靶点提供理论依据。第一部分ATRA对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和细胞周期的影响目的:本研究以胃癌MGC-803细胞为实验对象,探讨ATRA对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和细胞周期的影响。方法:1.CCK-8实验检测不同浓度ATRA作用MGC-803细胞24h、48h、72h后对MGC-803细胞增殖能力的影响。2.倒置显微镜下观察不同浓度ATRA作用MGC-803细胞48h后细胞形态和数量的变化。3.划痕实验检测不同浓度ATRA作用MGC-803细胞12h、24h、48h后细胞迁移能力的变化。4.流式细胞术检测不同浓度ATRA作用MGC-803细胞48h后对细胞周期的影响。5.实验数据应用SPSS26.0软件进行统计分析,以P＜0.05为差异有统计学意义。结果:1.CCK-8实验结果显示,ATRA可以显著抑制MGC-803细胞的增殖活性,且呈剂量-时间依赖性。2.倒置显微镜下观察发现,ATRA处理MGC-803细胞48h后,细胞失去正常形态变细长,大小不一,细胞之间连接疏松,活细胞数量明显减少。3.划痕实验结果显示,ATRA处理MGC-803细胞12h、24h和48h后,细胞迁移能力显著下降,且呈浓度依赖性。4.流式细胞术结果显示,ATRA处理MGC-803细胞48h后,G0/G1期细胞比例明显升高,S期细胞比例降低,而G2/M期细胞比例未见明显变化。结论:ATRA可明显抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖和迁移,其机制可能与改变细胞周期进程,诱导细胞阻滞在G0/G1期有关。第二部分ATRA抑制胃癌MGC-803细胞增殖和迁移与Cx43及m TOR/p70S6K信号通路之间的关系目的:根据第一部分实验结果,进一步探讨ATRA抑制胃癌MGC-803细胞增殖和迁移与Cx43及m TOR/p70S6K信号通路之间的关系。方法:1.不同浓度ATRA作用MGC-803细胞48h后,采用q RT-PCR检测各组中Cx43、m TOR和p70S6K m RNA表达水平。2.不同浓度ATRA作用MGC-803细胞48h后,采用Western Blot检测各组中Cx43、m TOR、p-m TOR、p70S6K、和p-p70S6K蛋白表达水平。3.实验数据应用SPSS26.0软件进行统计分析,采用Pearson进行相关性分析,以P＜0.05为差异有统计学意义。结果:1.QRT-PCR结果显示,与对照组相比,ATRA组细胞中Cx43 m RNA表达量明显升高,m TOR和p70S6K的m RNA表达量显著下降。Cx43与m TOR、p70S6K m RNA表达均呈强负相关,m TOR与p70S6K m RNA表达呈强正相关。2.Western Blot结果显示,与对照组相比,ATRA组细胞中Cx43蛋白表达量明显升高,p-m TOR、p-p70S6K蛋白表达量显著下降,而总m TOR和总p70S6K蛋白表达量与对照组无差异。Cx43与p-m TOR、p-p70S6K蛋白表达均呈强负相关,p-m TOR与p-p70S6K蛋白表达呈强正相关。结论:在胃癌MGC-803细胞中,ATRA可能通过上调Cx43的表达,直接或间接抑制了m TOR/p70S6K信号通路的激活,从而抑制胃癌细胞的增殖和迁移。