【摘 要】
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目的:1.筛选承德医学院附属医院南院区2020年8月至2021年9月分离的连续非重复多重耐药鲍曼不动杆菌（multidrug resistance Acinetobacter baumannii,MDR-AB）菌株,并检测其生物膜形成能力。2.探讨亚抑菌浓度（Subinhibitory concentration,sub-MIC）头孢哌酮舒巴坦联合替加环素或亚胺培南对多重耐药鲍曼不动杆菌生物膜形成
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目的:1.筛选承德医学院附属医院南院区2020年8月至2021年9月分离的连续非重复多重耐药鲍曼不动杆菌（multidrug resistance Acinetobacter baumannii,MDR-AB）菌株,并检测其生物膜形成能力。2.探讨亚抑菌浓度（Subinhibitory concentration,sub-MIC）头孢哌酮舒巴坦联合替加环素或亚胺培南对多重耐药鲍曼不动杆菌生物膜形成的体外影响及可能机制。3.进一步探究头孢哌酮舒巴坦联合替加环素或联合亚胺培南对多重耐药鲍曼不动杆菌成熟生物膜的体外影响。方法:1.依据MALDI-TOF MS鉴定和Vitek 2.0药敏结果留取2020年8月至2021年9月分离的多重耐药鲍曼不动杆菌60株。经MALDI-TOF MS再次鉴定后采用结晶紫半定量实验法测定菌株生物膜形成能力,并筛选出生物膜形成能力较强的菌株进行后续实验。2.通过微量肉汤稀释法测定临床分离菌株头孢哌酮舒巴坦、替加环素和亚胺培南的最低抑菌浓度（MIC）。3.棋盘法和结晶紫半定量实验检测sub-MIC头孢哌酮舒巴坦联合替加环素或亚胺培南对MDR-AB生物膜形成的影响。4.采用荧光定量PCR对用药前后生物膜相关基因omp A、aba I、ade G和bap的表达情况进行分析。5.棋盘法和结晶紫半定量实验检测头孢哌酮舒巴坦分别与替加环素或亚胺培南联合作用对MDR-AB成熟生物膜形成的影响。结果:1.60株MDR-AB中57株具有生物膜形成能力（95%）,其中生物膜形成能力弱阳性的有25株（44%）,形成能力阳性的有28株（49%）,形成能力强阳性的有4株（7%）。2.32株生物膜形成能力较强的临床分离株中,替加环素对MDR-AB的MIC为0.5～8μg/ml,头孢哌酮舒巴坦（2:1）对MDR-AB的MIC为128～256μg/ml,亚胺培南对MDR-AB的MIC为32～512μg/ml。3.菌株接种0h立即给予药物干预,药物干预48h后检测,单独应用亚抑菌浓度头孢哌酮舒巴坦、替加环素和亚胺培南对MDR-AB的生物膜形成均具有一定的抑制效果。当头孢哌酮舒巴坦浓度固定时,随着替加环素和亚胺培南浓度的增加,A590nm值逐渐下降（P＜0.05）;当替加环素或亚胺培南浓度固定时,随着头孢哌酮舒巴坦浓度增加,A590nm值也逐渐下降（P＜0.05）。亚抑菌浓度头孢哌酮舒巴坦与替加环素或亚胺培南联合应用时,对MDR-AB生物膜的抑制效果明显强于该三种药物的单独作用。4.基因表达结果表明,与未经药物作用的MDR-AB相比,加入1/4MIC替加环素+1/4MIC头孢哌酮舒巴坦或1/4MIC亚胺培南+1/4MIC头孢哌酮舒巴坦后,MDR-AB生物膜相关基因omp A、aba I、ade G和bap的表达均呈现出明显下调趋势（P＜0.05）。5.菌株接种后48h给予药物干预,药物干预24h后检测,单独应用1MIC头孢哌酮舒巴坦对8株MDR-AB的生物膜出现诱导现象,于590nm处的吸光度比其同组的阳性对照株分别增高0.035、0.009、0.015、0.006、0.014、0.042、0.011和0.010。当头孢哌酮舒巴坦与替加环素或亚胺培南联合应用时,对MDR-AB成熟生物膜的破坏效果明显强于该三种药物的单独作用（P＜0.05）。结论:1.MDR-AB大多都具有形成生物膜的能力。2.在细菌未形成生物膜时,亚抑菌浓度头孢哌酮舒巴坦与替加环素或亚胺培南的联合应用可通过下调生物膜相关基因的表达有效的抑制MDR-AB生物膜的形成。3.在细菌形成成熟的生物膜后,头孢哌酮舒巴坦与替加环素或亚胺培南的联合应用可对MDR-AB成熟生物膜的破坏起到更好的作用,且与联合用药的药物浓度成正比。
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