【摘 要】
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第一部分circ ATP5C1在乳腺癌组织中的表达及与免疫学指标和预后的关系目的:探讨circ ATP5C1在乳腺癌组织中的表达及与免疫学指标和预后的关系。方法:1.采用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）方法检测circ ATP5C1在乳腺癌组织芯片中的表达。2.结合乳腺癌患者临床病理资料,分析circ ATP5C1与临床生物学指标、免疫
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第一部分circ ATP5C1在乳腺癌组织中的表达及与免疫学指标和预后的关系目的:探讨circ ATP5C1在乳腺癌组织中的表达及与免疫学指标和预后的关系。方法:1.采用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）方法检测circ ATP5C1在乳腺癌组织芯片中的表达。2.结合乳腺癌患者临床病理资料,分析circ ATP5C1与临床生物学指标、免疫指标、及其预后关系。结果:1.FISH结果表明,circ ATP5C1主要定位于乳腺癌的细胞质中。2.circ ATP5C1的表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤侵袭、淋巴结转移、Her-2和PR无相关性（P＞0.05）。circ ATP5C1高表达与乳腺癌患者的组织学分级（c2=4.160,P=0.041）、临床分期（c2=4.442,P=0.035）、PD-L1（c2=4.402,P=0.036）、ER（c2=4.160,P=0.041）呈正相关。3.Kaplan-Meier分析表明,circ ATP5C1高表达的乳腺癌患者总生存率低于其表达低表达的患者（P＜0.05）。4.多变量Cox回归分析显示,circ ATP5C1的表达、PD-L1表达、淋巴结转移是影响乳腺癌患者预后的独立因素。小结:circ ATP5C1在乳腺癌组织中高表达且与乳腺癌患者的组织学分级、临床分期、PD-L1、ER成正相关;circ ATP5C1高表达、PD-L1表达、淋巴结转移代表着乳腺癌患者的总体生存能力较差。第二部分circ ATP5C1在乳腺癌中的生物学功能及对PD-L1表达的影响目的:探讨circ ATP5C1在乳腺癌中的生物学功能及对PD-L1表达的影响。方法:1.采用RT-PCR法检测circ ATP5C1在乳腺癌细胞中的表达。2.采用放线菌素D实验检测circ ATP5C1在乳腺癌细胞中的稳定性。3.通过FISH实验检测circ ATP5C1在乳腺癌细胞中的定位。4.通过q RT-PCR法进一步检测乳腺癌细胞中circ ATP5C1的表达。5.采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测乳腺癌细胞的增殖能力。6.采用划痕愈合实验和Transwell实验检测乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。7.采用q RT-PCR法和western blot实验检测乳腺癌细胞中PD-L1的表达。结果:1.RT-PCR结果表明,以乳腺癌细胞的c DNA和g DNA为模板,环状转录本只能过发散引物在c DNA中扩增出来,而线性转录本可通过聚合引物在c DNA和g DNA中同时扩增出来。2.放线菌素D实验结果显示,circ ATP5C1比其对应的线性转录本更稳定,半衰期更长。3.FISH实验显示circ ATP5C1主要位于细胞质中,4.q RT-PCR结果显示circ ATP5C1在MDA-MB-231和BT-549中表达相对较低,MCF-7和MDA-MB-453细胞中circ ATP5C1表达相对较高。5.CCK-8法和平板克隆形成实验结果显示circ ATP5C1使乳腺癌细胞增殖能力显著增强（P＜0.05）。6.划痕愈合实验和Transwell实验结果显示circ ATP5C1使乳腺癌细胞迁移和侵袭能力显著增强（P＜0.05）。7.q RT-PCR法和western blot实验结果显示circ ATP5C1使免疫检查点分子PD-L1的表达显著增强（P＜0.05）。小结:circ ATP5C1主要位于细胞质中且比相应线性转录本稳定,过表达cir c ATP5C1后,乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著增强,敲低circ A TP5C1后,乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低。且circ ATP5C1在m RNA和蛋白水平使免疫检查点分子PD-L1的表达显著提高。结论:1.circ ATP5C1在乳腺癌组织中高表达,与乳腺癌患者的组织学分级、临床分期、PD-L1、ER成正相关。circ ATP5C1高表达、PD-L1高表达、淋巴结转移代表着乳腺癌患者的总体生存能力较差。2.circ ATP5C1促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与其促进PD-L1的表达,引起免疫逃逸有关。
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