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目的：
探讨高尔基体蛋白3(GOLPH3)在肝细胞癌(HCC)中的功能及作用机制，并探讨GOLPH3与HCC患者临床特征及中医证型的相关性，以期为肝细胞癌患者提供新的治疗策略。
方法：
1.采用免疫组织化学法、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR技术检测HCC临床标本和HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3的mRNA及蛋白的表达水平，并采用卡方检验分析GOLPH3的蛋白表达水平与HCC患者临床特征的相关性。
2.采用SiRNA沉默HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H的GOLPH3基因来研究GOLPH3的功能：通过MTT法分析细胞增殖;Annexin V-FITC/PI染色和hoechst33342染色检测凋亡细胞，并检测细胞半胱天冬酶3/7活性，三者结合研究GOLPH3对HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H凋亡的影响。
3.使用慢病毒转染的方法，构建并筛选GOLPH3稳定低表达的MHCC97L、MHCC97H细胞，建立GOLPH3稳定低表达的MHCC97L、MHCC97H皮下移植瘤模型来研究GOLPH3在体内肿瘤生长中的作用。
4.采用免疫印迹和免疫组织化学方法检测GOLHP3在mTOR信号通路中的作用。
5.采用mTOR信号通路的激活剂MHY1485验证GOLHP3在mTOR信号通路中的作用。
6.运用Fisher精确检验分析HCC中医证型与GOLPH3表达及患者临床特征的相关性。
结果：
1.HCC临床标本和HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3mRNA和蛋白表达水平与正常对照组相比显著上调（P＜0.05)。卡方检验结果表明在HCC患者中GOLPH3的表达水平与血清AFP水平显著相关（P=0.006）;GOLPH3的表达水平与性别、年龄、HBsAg、肿瘤大小、血管侵袭和肝硬化之间没有明显的相关性(P＞0.05）。
2.SiRNA沉默MHCC97L、MHCC97H细胞中GOLPH3的表达均能使细胞增殖受到抑制并且促进细胞凋亡。
3.慢病毒敲低GOLPH3表达导致MHCC97L、MHCC97H皮下移植瘤生长受限。
4.HCC临床标本癌组织中mTOR信号通路相关的关键蛋白mTOR，AKT和S6K1(p70核糖体蛋白S6激酶)磷酸化水平明显高于正常肝组织（P＜0.05)。体外和体内实验表明，抑制MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3的mRNA和蛋白的表达水平后，mTOR、AKT和S6K1蛋白的磷酸化水平与正常对照组相比显著降低（P＜0.05)。
5.mTOR激活剂MHY1485可以部分抵消因GOLPH3沉默所引起的MHCC97L、MHCC97H细胞的凋亡。
6.Fisher精确检验分析结果表明HCC中医证型与HCC临床标本中GOLPH3蛋白表达水平无明显的相关性(P＞0.05)，与HCC患者临床特征之间亦无明显的相关性(P＞0.05)。
结论：
本研究表明，GOLPH3可能通过激活mTOR信号通路促进肝癌的发生，GOLPH3可能是一种潜在的HCC生物标志物和治疗靶点，为以GOLPH3为HCC生物标志物的诊疗策略及以GOLPH3为治疗靶点的药物开发提供了科学依据。
探讨高尔基体蛋白3(GOLPH3)在肝细胞癌(HCC)中的功能及作用机制，并探讨GOLPH3与HCC患者临床特征及中医证型的相关性，以期为肝细胞癌患者提供新的治疗策略。
方法：
1.采用免疫组织化学法、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR技术检测HCC临床标本和HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3的mRNA及蛋白的表达水平，并采用卡方检验分析GOLPH3的蛋白表达水平与HCC患者临床特征的相关性。
2.采用SiRNA沉默HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H的GOLPH3基因来研究GOLPH3的功能：通过MTT法分析细胞增殖;Annexin V-FITC/PI染色和hoechst33342染色检测凋亡细胞，并检测细胞半胱天冬酶3/7活性，三者结合研究GOLPH3对HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H凋亡的影响。
3.使用慢病毒转染的方法，构建并筛选GOLPH3稳定低表达的MHCC97L、MHCC97H细胞，建立GOLPH3稳定低表达的MHCC97L、MHCC97H皮下移植瘤模型来研究GOLPH3在体内肿瘤生长中的作用。
4.采用免疫印迹和免疫组织化学方法检测GOLHP3在mTOR信号通路中的作用。
5.采用mTOR信号通路的激活剂MHY1485验证GOLHP3在mTOR信号通路中的作用。
6.运用Fisher精确检验分析HCC中医证型与GOLPH3表达及患者临床特征的相关性。
结果：
1.HCC临床标本和HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3mRNA和蛋白表达水平与正常对照组相比显著上调（P＜0.05)。卡方检验结果表明在HCC患者中GOLPH3的表达水平与血清AFP水平显著相关（P=0.006）;GOLPH3的表达水平与性别、年龄、HBsAg、肿瘤大小、血管侵袭和肝硬化之间没有明显的相关性(P＞0.05）。
2.SiRNA沉默MHCC97L、MHCC97H细胞中GOLPH3的表达均能使细胞增殖受到抑制并且促进细胞凋亡。
3.慢病毒敲低GOLPH3表达导致MHCC97L、MHCC97H皮下移植瘤生长受限。
4.HCC临床标本癌组织中mTOR信号通路相关的关键蛋白mTOR，AKT和S6K1(p70核糖体蛋白S6激酶)磷酸化水平明显高于正常肝组织（P＜0.05)。体外和体内实验表明，抑制MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3的mRNA和蛋白的表达水平后，mTOR、AKT和S6K1蛋白的磷酸化水平与正常对照组相比显著降低（P＜0.05)。
5.mTOR激活剂MHY1485可以部分抵消因GOLPH3沉默所引起的MHCC97L、MHCC97H细胞的凋亡。
6.Fisher精确检验分析结果表明HCC中医证型与HCC临床标本中GOLPH3蛋白表达水平无明显的相关性(P＞0.05)，与HCC患者临床特征之间亦无明显的相关性(P＞0.05)。
结论：
本研究表明，GOLPH3可能通过激活mTOR信号通路促进肝癌的发生，GOLPH3可能是一种潜在的HCC生物标志物和治疗靶点，为以GOLPH3为HCC生物标志物的诊疗策略及以GOLPH3为治疗靶点的药物开发提供了科学依据。