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广袤的神州大地分布着数以万计的大大小小的盐田,盐田因其特殊的环境孕育了大量的可适应高渗透压高盐的嗜盐菌,独特的生理构造使得嗜盐菌能分泌许多具有特殊功能的次级代谢产物,蛋白酶就是其中之一。嗜盐菌所分泌的胞外蛋白酶,能够直接在高盐环境下存活并进行催化反应,可以应用于许多极端条件下的蛋白酶反应。本论文从山东潍坊昌邑某盐田的晒盐水中筛选出三株可产蛋白酶的中度嗜盐菌Salinivibrio sp.MK070915、Idiomarina sp.MK070916和Salinivibrio sp.MK070917,对其进行生理生化、生长曲线、环境因素和碳氮源对菌株产酶的影响、菌株所产酶的酶学性质以及菌株发酵条件优化的探究。主要研究内容包括以下四个部分:(1)对产蛋白酶的嗜盐菌进行筛选,并对其生理生化特性进行探究。共筛选出161株嗜盐菌株,初筛得到三株产蛋白酶能力最强的菌株MK070915、MK070916和MK070917,通过复筛验证三株菌产蛋白酶的稳定性,三株菌株均为革兰氏阴性菌,对明胶的水解能力较强,其他酶类的代谢能力较为广泛,结合分子生物学鉴定,将三株菌株分别命名为Salinivbrio sp.MK070915、ldiomarina sp.MK07091 6 和 Salinivibrio sp.MK070917。(2)采用比浊法测定三株嗜盐菌株的生长曲线,对影响三株嗜盐菌株产蛋白酶的环境因素和碳氮源进行探究。结果表明:Salinivibrio sp.MK070915最适产酶条件为NaCl浓度为5%,pH为8.0,培养温度为20℃,碳源为麦芽糖,氮源为蛋白胨,酶活为34.29 U;Idiomarina sp.MK070916最适产酶条件为NaCl浓度为10%,pH为8.0,培养温度为35℃,碳源为酵母浸出物,氮源为脱脂牛奶,酶活为23.91 U;Salinivibrio sp.MK070917最适产酶条件为NaCl浓度为10%,pH为7.0,培养温度为30℃,碳源为糊精,氮源为蛋白胨,酶活为20.69 U。(3)对三株嗜盐菌株所产的蛋白酶的酶学性质进行探究。结果表明:Salinivibrio sp.MK070915,最适反应温度为55℃,最适pH为7.0,Cu2+的添加对酶活有促进作用;Idiomarina sp.MK070916,最适反应温度为50℃,最适pH为8.0,Fe3+、Cu2+等金属离子对酶活具有促进作用;Salinivibrio sp.MK070917,最适反应温度为55℃,最适pH为7.0,Fe3+、Ca2+、Cu2+和Co2+的添加对酶活具有促进作用;三株菌所产的蛋白酶具有一个相同的特点高浓度的盐对酶活具有抑制作用。(4)通过响应面法对三株嗜盐菌株进行产蛋白酶发酵优化进行进一步的探究,以Gibbons培养基为基底,得到菌株最佳培养条件。结果表明:Salinivibrio sp.MK070915,碳源麦芽糖的添加量为1.85%,氮源蛋白胨的添加量为1.17%,KCl的添加量为1‰,柠檬酸钠的添加量为5‰,预测最高产酶量为44.09 U,验证实验结果为44.22 U,与理论值相比差异为0.299%;Idiomarina sp.MK070916,氮源脱脂牛奶的添加量为1.5%,MgSO4·7H2O的添加量为3%;Fe3+浓度为3.13mM;接种量为4%,预测最高产酶量为30.56 U,验证实验结果为30.19 U,与理论值相比差异为1.2%;Salinivibrio sp.MK070917,碳源糊精的添加量为0.66%,氮源蛋白胨的添加量为1.11%,KCl的添加量为1.16‰,柠檬酸钠的添加量为2.10‰,预测最高产酶量为30.192 U,验证实验结果30.18 U,与理论值相比差异为0.5%。