【摘 要】
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目的探讨纤维粘连蛋白(fibronectin, FN)-整合素对哮喘气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells, ASMCs)分泌功能的调控。方法利用组织贴壁法和多酶混合消化法原代培养大
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目的探讨纤维粘连蛋白(fibronectin, FN)-整合素对哮喘气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells, ASMCs)分泌功能的调控。方法利用组织贴壁法和多酶混合消化法原代培养大鼠ASMCs,并用细胞形态学和免疫组化SABC方法鉴定;将正常大鼠和哮喘大鼠ASMCs均分别种植在涂覆有FN的和空白(无FN涂覆)的玻片上,通过SP免疫组化方法检测细胞爬片中粘着斑蛋白的表达。整合素抗体干预如上处理的正常及哮喘ASMCs,不做干预的如上处理的正常及哮喘ASMCs作为对照组,采用RT-PCR方法检测RANTES(regulated on activated normal T cell expressed and secreted)、转化生长因子-β1(transcription gowth factor-β1, TGF-β1)mRNA的表达水平;ELISA方法检测各组培养上清中RANTES蛋白水平。结果原代培养的细胞呈典型的“谷峰状”生长,胞质内特异性的平滑肌肌动蛋白呈阳性表达,符合平滑肌细胞的形态学特征和生物学特性。FN作用的哮喘大鼠ASMCs粘着斑蛋白的表达明显增加,但未经FN作用的哮喘大鼠ASMCs及经(或未经)FN作用的正常大鼠ASMCs粘着斑蛋白均呈阴性表达。在哮喘细胞中,FN处理组较无FN处理的空白组TGF-β1、RANTES mRNA的表达水平和细胞培养上清中的RANTES蛋白水平均显著增加(P<0.05);整合素抗体+空白组的RANTES、TGF-β1 mRNA表达水平和细胞培养上清中的RANTES蛋白水平较空白组表达显著减少(P<0.05);整合素抗体+FN组的RANTES、TGF-β1 mRNA的表达和细胞培养上清中的RANTES蛋白水平较FN处理组表达显著减少(P<0.05)。结论FN促进哮喘大鼠ASMCs粘着斑蛋白的表达;FN-整合素信号通路可能参与细胞外基质对哮喘大鼠ASMCs分泌功能的调控。
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