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在脊椎动物中,SOX9通过SOM介导的正向自我调节,在体细胞发育和成体再生过程中发挥着关键的、广泛的、保守的作用,但是对于扬子鳄SOX9的研究却非常少。
本研究利用3&5RACE、微滴式数字PCR、HE染色、免疫荧光、GFP融合蛋白细胞定位检测等方法,对SOX9在扬子鳄胚胎肾脏发育过程中的表达及核胞质穿梭现象进行深入探究。研究结果表明,从初孵扬子鳄的肾脏中克隆了SOX9基因,其cDNA全长是3878bp,包括一个开放阅读框编码494个氨基酸。通过氨基酸比对分析发现,SOX9具有高度保守的功能结构域。利用微滴式数字PCR技术,发现SOX9的mRNA丰度值在扬子鳄肾脏胚胎发育的过程中变化显著;利用免疫荧光技术检测到SOX9蛋白的核胞质穿梭现象,SOX9以微小的不规则的红色荧光亮点簇集分布在肾小管上皮细胞的细胞核和细胞质中,并且SOX9蛋白的表达水平在肾脏的不同胚胎发育阶段有显著差异,推测SOX9蛋白的核胞质穿梭在肾脏胚胎发育的过程中对SOX9蛋白表达的调节是至关重要的。用荧光显微镜观察pEGFP-C2-SOX9及其缺失体在NIH3T3细胞中的表达和定位,SOX9载体和缺失Sox_N载体的荧光均呈现核分布,而缺失SOX-TCF_HMG-box载体的荧光呈胞浆胞核共分布,与SOX9载体相比,细胞质中荧光的分布相对较多,推测HMG结构域可能影响SOX9蛋白的亚细胞分布,从而介导SOX9蛋白的核胞质穿梭。这些数据为进一步研究非哺乳动物SOX9在肾脏胚胎发育生物学和分子生物学上奠定了重要的基础,同时也为扬子鳄SOX9蛋白的核胞质穿梭现象的研究提供了新的思路,SOX9蛋白的核胞质穿梭可能对于肾脏的胚胎发育具有重要意义。
本研究利用3&5RACE、微滴式数字PCR、HE染色、免疫荧光、GFP融合蛋白细胞定位检测等方法,对SOX9在扬子鳄胚胎肾脏发育过程中的表达及核胞质穿梭现象进行深入探究。研究结果表明,从初孵扬子鳄的肾脏中克隆了SOX9基因,其cDNA全长是3878bp,包括一个开放阅读框编码494个氨基酸。通过氨基酸比对分析发现,SOX9具有高度保守的功能结构域。利用微滴式数字PCR技术,发现SOX9的mRNA丰度值在扬子鳄肾脏胚胎发育的过程中变化显著;利用免疫荧光技术检测到SOX9蛋白的核胞质穿梭现象,SOX9以微小的不规则的红色荧光亮点簇集分布在肾小管上皮细胞的细胞核和细胞质中,并且SOX9蛋白的表达水平在肾脏的不同胚胎发育阶段有显著差异,推测SOX9蛋白的核胞质穿梭在肾脏胚胎发育的过程中对SOX9蛋白表达的调节是至关重要的。用荧光显微镜观察pEGFP-C2-SOX9及其缺失体在NIH3T3细胞中的表达和定位,SOX9载体和缺失Sox_N载体的荧光均呈现核分布,而缺失SOX-TCF_HMG-box载体的荧光呈胞浆胞核共分布,与SOX9载体相比,细胞质中荧光的分布相对较多,推测HMG结构域可能影响SOX9蛋白的亚细胞分布,从而介导SOX9蛋白的核胞质穿梭。这些数据为进一步研究非哺乳动物SOX9在肾脏胚胎发育生物学和分子生物学上奠定了重要的基础,同时也为扬子鳄SOX9蛋白的核胞质穿梭现象的研究提供了新的思路,SOX9蛋白的核胞质穿梭可能对于肾脏的胚胎发育具有重要意义。