【摘 要】
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细胞全能性是指单个细胞具有产生个体所有类型细胞的能力,包括胚胎和胚外组织。到目前为止,我们对全能性的分子机制还知之甚少。体外培养的小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)会有一小部分激活逆转录转座子MERVL(murine endogenous retrovirus with leucine tRNA primer)及部分胚胎2细胞时期(2-cell state,2C
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细胞全能性是指单个细胞具有产生个体所有类型细胞的能力,包括胚胎和胚外组织。到目前为止,我们对全能性的分子机制还知之甚少。体外培养的小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)会有一小部分激活逆转录转座子MERVL(murine endogenous retrovirus with leucine tRNA primer)及部分胚胎2细胞时期(2-cell state,2C state)特异表达基因的转录,这些细胞被称为“2细胞样干细胞(2-cell-like cells,2CLCs)”。由于与2细胞期的小鼠胚胎共享部分转录程序,且比胚胎易于培养和操作,所以近年来被用作模型解析合子基因组激活的分子机制。通过构建2C报告细胞系,进行基于CRISPR-Cas9基因编辑技术的高通量筛选,我们发现剪接因子的敲除能够促进2CLCs比例的提高。经过验证,我们发现剪接因子Rnps1、Snrpd1、U2af1、U2af2、Sf3b1的缺失及剪接抑制剂PladienolineB处理显著促进2C特异基因的激活。机制研究表明,剪接因子的敲低及剪接抑制剂的处理不会导致逆转录转座子LINE1(long interspersed nuclear element 1)转录本的减少。机制研究表明,剪接因子的敲低及剪接抑制剂通过激活ATR激酶,导致双同源盒蛋白Dux(double homeobox)的激活,从而促进合子转录程序的激活。通过分析已发表的转录组测序(RNA-seq)数据,我们发现人和小鼠剪接因子在合子基因组激活的早期相对的低表达,提示RNA剪接抑制可能也是合子基因组激活的关键机制。因此,我们的工作有利于更好地理解早期胚胎发育过程中合子基因组激活的调控。
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