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目的:引导骨组织再生(Guided Bone Regeneration,GBR)技术在口腔领域的临床应用十分普遍,包括牙周科、颌面外科、种植等学科均有广泛的应用。该技术通过膜的屏障作用,将牙体及种植体周围的软硬组织机械性的分开,防止结缔组织长入,避免纤维组织占据骨缺损区,维持血凝块的稳定和腔隙的占据,最大程度地为再生骨组织提供足够必要的空间和环境,进而实现修复骨缺损的目的。目前,Bio-Gide(R)屏障膜是引导骨组织再生膜临床应用的金标准,其主要成分为Ⅰ、Ⅲ型猪真皮胶原的,具有良好的屏障作用,有利于其屏障下方的骨再生修复,但由于高昂的价格极大的限制了其临床的普及应用。因此研制一款屏障作用优良,骨传导性及骨诱导性良好且价格适中的国产化屏障膜具有重大的临床意义,其市场应用前景也十分乐观。本实验中所评价的两种GBR膜,是在清华大学所带领的团队下自主研发的新型胶原膜,其中单层膜为纯胶原膜,成分与Bio-Gide(R)相似,但为单层结构;双层膜为复合胶原膜,整体胶原与羟基磷灰石的比例为90%∶10%,其光滑层为纯胶原层,粗糙层为矿化胶原层。本研究通过动物体内植入实验,评价该新型国产引导骨组织再生胶原膜的屏障作用,考察GBR膜屏障下的人工骨材料的早期成骨效果,力求获得一种新型的引导骨组织再生胶原膜材料,并为其临床应用提供实验依据。 方法:选取2只健康、12-18月龄的Beagle犬作为实验对象。全麻状态下,在所有实验犬的左侧下颌第二前磨牙(P2)、第三前磨牙(P3)、第四前磨牙(P4)、以及第一磨牙(M1)的颊侧根分叉处,采用磨骨术,利用高速手机各制备一个大小为5mm×5mm×5mm的骨缺损,制备过程是在X光片的参照下进行,避免损伤牙神经。冲洗创面,在四个缺损中分别填入骼金(R)人工骨材料,P2缺损作为对照组不再做处理(A组)。于P3的骨充填材料表面覆盖Bio-Gide(R)胶原屏障膜(B组),P4表面覆盖单层胶原屏障膜(C组),M1表面覆盖双层胶原屏障膜(D组),之后缝合。四周后对两只实验犬的右侧下颌骨进行相同的术式,处死前14d、13d注射25mg/kg的茜紊红,之前4d、3d注射20mg/kg的钙黄绿素。于第一次实验八周后灌注处死收集标本。通过大体观察、X线检查、骨组织荧光切片以及硬组织骨磨片Goldners三色染色法,镜下观察并分析缺损区分别在4周和8周时的组织修复情况,同时借助统计学软件SPSS17.0对所得数据进行计算分析,以探讨两种新型屏障膜材料早期修复骨缺损的能力。 结果:术后Beagle犬无异常表现,无死亡,无炎症反应,口内缝合处恢复良好,牙周质地色泽健康。X光显示,4周时,对照组缺损区周围可见新骨生成,骨白线模糊不清,中央部位可见明显缺损影像。实验组之间区别并不明显,新生骨的密度均低于原始骨质。术后8周,实验组的X线表现为缺损处骨质增生,可见骨密度较之4周升高,缺损区域均比对照组更小。荧光剂双色标记显示,测得三组实验组以及一组对照组中,茜素红及钙黄绿素所成两条荧光带间的平均距离,统计学分析,得到两条荧光带间的距离,最终求得平均矿化率(μm/d)。四周:A组:1.2±0.329μm/d、B组:2.594±0.558μm/d、C组:1.267±0.304μm/d、D组:2.877±0.321μm/d;八周:A组:1.616±0.298μm/d、B组:4.1±0.85μm/d、C组:1.902±0.165μm/d、D组:3.582±0.376μm/d。经独立样本t检验计算结果显示,有屏障膜覆盖的三个实验组成骨速率要高于对照组,A和B、A和D、C和D之间具有显著性,显著性P<0.01;B和D、A和C之间则没有显著的统计学差异。Goldners三色法染色骨磨片光学显微镜下观察可见,实验组有分布较广的骨小梁,骨质丰富,骨小梁之间为大量且均匀分散的成骨细胞;对照组中包括编织骨及板层骨,成骨细胞较实验组稀疏,骨小梁分布广泛且数量较少。 结论:在本实验条件下,单层胶原膜、双层纳米羟基磷灰石胶原复合膜均有较好的屏障作用,无纤维结缔组织长入。本实验条件下,人工骨材料的骨矿化沉积率(MAR)在双层纳米羟基磷灰石胶原复合膜组合与Bio-Gide(R)组无显著性差异;但单层胶原膜较双层纳米羟基磷灰石胶原复合膜以及Bio-Gide(R)有显著性差异。