【摘 要】
:
研究背景:化疗是肺癌的主要治疗手段之一,临床常用的肺癌化疗药物包括吉西他滨(Gemcitabine,GEM)、铂类、依托泊苷、紫杉醇等。GEM通过其三磷酸代谢物阻止DNA复制/合成,最终导致细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。GEM是目前针对非小细胞肺癌的一线化疗药,但患者产生耐药性后严重影响GEM化疗效果。明确肺癌GEM耐药机制对提高肺癌患者生存率具有重要意义。Cullin4B(CUL4B)是Cullin
论文部分内容阅读
研究背景:化疗是肺癌的主要治疗手段之一,临床常用的肺癌化疗药物包括吉西他滨(Gemcitabine,GEM)、铂类、依托泊苷、紫杉醇等。GEM通过其三磷酸代谢物阻止DNA复制/合成,最终导致细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。GEM是目前针对非小细胞肺癌的一线化疗药,但患者产生耐药性后严重影响GEM化疗效果。明确肺癌GEM耐药机制对提高肺癌患者生存率具有重要意义。Cullin4B(CUL4B)是Cullin-Ring泛素E3连接酶复合物的支架蛋白参与调控多种生长发育过程。已证明,CUL4B参与调控多种肿瘤细胞增殖和迁移。本实验室前期结果显示:在胃癌、膀胱癌等细胞中,敲低CUL4B会增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,提示CUL4B可能参与调控肿瘤化疗耐药。但CUL4B是否调控肺癌GEM耐药目前尚不清楚。研究目的:明确CUL4B在调控肺癌细胞GEM耐药中的作用并探究其相关机制。研究方法:分别构建敲低和过表达CUL4B的肺癌细胞株;通过MTT、EdU掺入实验、克隆形成实验、划痕实验等检测改变CUL4B表达对GEM处理后肿瘤细胞生长、增殖和迁移等影响;Western blot检测改变CUL4B表达对多种耐药相关蛋白表达的影响;芯片检测结合软件分析发现受CUL4B调控并参与耐药蛋白表达调控的候选miRNA;实时荧光定量PCR及ChIP等实验验证miRNA表达及分析调控机制。研究结果:(1)CUL4B表达水平与肺癌细胞对GEM的敏感性相关。对肺癌细胞株H1299和A549中CUL4B表达情况检测发现CUL4B在H1299中的表达水平显著高于A549,而H1299细胞的GEM半抑制浓度显著高于A549细胞的GEM半抑制浓度;改变A549细胞和H1299细胞中CUL4B表达水平,发现敲低CUL4B则提高细胞对GEM的敏感性,而过表达CUL4B显著降低A549细胞和H1299细胞对GEM敏感性。(2)CUL4B正调控耐药相关蛋白ABCB1表达。检测耐药相关蛋白在CUL4B不同表达水平肺癌细胞中的表达情况,发现CUL4B正调控ABCB1蛋白表达,而且是发生在转录后水平。(3)CUL4B通过miR-7-1-3p调控ABCB1表达。利用实验室前期获得的CUL4B敲低A549及对照细胞中miRNA检测结果,结合软件预测,筛选出了 6个可能参与CUL4B调控ABCB1的候选miRNA,实时荧光定量PCR分析证实CUL4B负调控这些候选miRNA转录;利用miRNA mimics/inhibitor处理细胞,发现只有miR-7-1-3p的mimics和inhibitor可以影响ABCB1表达。转染miR-7-1-3p inhibitor可显著减弱由CUL4B敲低引起的GEM敏感性增加,转染miR-7-1-3p mimics则基本恢复了 CUL4B高表达导致的GEM敏感性降低。双荧光素酶报告基因实验提示miR-7-1-3p与ABCB13’-UTR区域结合并调控ABCB1表达。(4)CUL4B复合物协同PRC2、HDAC复合物抑制miR-7-1-3p转录。qChIP实验发现CUL4B可以结合在miR-7-1-3p转录起始点上游-3.0 kb~-2.0 kb区域;进一步分析显示敲低 CUL4B 显著减少 H2AK119ub1、EZH2、H3K27me3、HDAC1 和 HDAC3 在miR-7-1-3p启动子的结合。结论:CUL4B参与调控肺癌细胞GEM耐药;CUL4B协同PRC2复合物及HDAC复合物通过影响组蛋白修饰抑制miR-7-1-3p转录进而促进ABCB1表达。
其他文献
研究背景早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)是一种导致女性不孕不育的常见生殖内分泌疾病,是指女性在40岁前卵巢功能衰退,表现为月经稀发或闭经,促性腺激素水平升高(FSH>25 IU/L),雌二醇水平降低。既往美国生殖医学协会(American Society for Reproductive Medicine,ASRM)将 POI 疾病进程分
研究背景盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,POP)是老年女性群体中的常见病。目前盆腔器官脱垂的治疗并无统一标准,对于非手术治疗失败或拒绝非手术治疗的患者,手术治疗是他们改善症状、恢复正常生活的最后一道防线。手术治疗能够在短时间内改善症状、恢复解剖结构,然而部分患者却未能如愿在手术后迎来正常的生活:解剖结构虽然恢复正常,尿失禁症状却随之而来。尿失禁与盆腔器官脱垂同属于盆底功能
研究目的:通过收集分析不明原因反复胚胎种植失败(Unexplained recurrent implantation failure,URIF)患者与首次接受体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)即获得临床妊娠的不孕症患者的一般临床资料与阴道微生态结果,探讨常规细菌培养-镜检评价体系下阴道微生态结果对URIF患者体外助孕结局
种子包衣是一种高效、新兴的种子处理技术。该技术将外源性材料与种子紧密结合,从而提高种子性能,最终提高作物产量和品质。植物有益微生物(plant beneficial microorganisms, PBM)是指能够促进植物养分吸收、增强其对生物和非生物胁迫的耐受力并促进植物生长或减少农业化学投入的微生物。因此,PBM可以作为一种微生物种子包衣剂。微生物种子包衣作为一种能够显著提高作物产量、经济效益
乡镇党政人才是推动党和国家各项大政方针的落地落实的保障。基层党政人才队伍稳定,则乡镇经济社会发展和各项民生保障工作能够稳步推进,党的各项事业能够顺利落实;基层党政人才短缺则会直接导致基层乡镇政府出现严重的执行窘境,势必严重影响基层乡镇党政机关职能的有效发挥,更加的不利于乡镇的综合治理。随着经济社会的发展和政府自身建设的不断完善,特别是全面深化改革的不断深入和乡村振兴战略的全面实施,基层乡镇的管理职
当前国内老龄化速度不断加强,养老问题日渐明显。为了应对日渐突出的养老问题,国家出台了一系列的政策。特别是对民办养老机构给予强有力的扶持,巨大的市场潜力和利好的政策支持给民办养老机构的发展带来了机遇。国家及其地方各级政府结合了本地区的实际情况,颁布了多项与民办养老机构有关的扶持政策,有效推动了社会力量参与养老服务领域的进程。但是,仍然存在一些不足之处。例如:对民办养老机构的扶持政策强度较低,口头上承
2020年,在云南省元谋县使用四种种子包衣剂对西藏主栽的青稞(藏青17)、小麦(高原437)进行种子包衣处理,观察对南繁青稞、小麦田间出苗率、株高、穗数、穗粒数、千粒重及产量的影响。结果表明,与清水对照相比,四种种子包衣剂处理均极显著提高了青稞和小麦的田间产量,其中45%烯肟·苯醚·噻虫嗪包衣剂处理,还显著提高了田间出苗率、株高、穗数、穗粒数,在四种包衣剂中效果最好。建议在后续的西藏青稞和小麦种子
经济在发展,社会在进步,社会联系也在增多,劳资关系也越来越多元化。近年来,各种关于劳动关系的法律纠纷频繁地发生,侵害广大劳动者的合法权利的纠纷案件屡见不鲜。因此,我们国家和社会的福祉和经济稳定需要通过妥善处理各种工作的关系来维持。在这样的经济全面发展的社会大背景下,逐步涌现出来一个具有丰富多样性的公民群体,即农民工群体。当侵害我国农民工的合法权益的用工情况出现时,势必会在一定程度上阻碍我国经济的发
“城乡融合发展体制机制和政策体系”是党的十九大提出的重要方针,目的在于破解城乡二元结构,实现城乡发展一体化。水利作为农业农村发展的重要基础设施,是支撑城乡融合发展的重要保障,而城乡供水一体化则是解决农村居民用水安全及促进城乡区域经济全面、协调发展的重要途径。城乡供水一体化是指把城市与乡村作为一个整体,将城市供水管网延伸至乡村,并将乡村独立、分散、简陋的供水模式转变为集中的、科学的、现代化的供水模式
本研究利用稀释涂布平板法从烟草根、茎、叶中分离、筛选出对烟草炭疽病病菌具有抑制作用的拮抗菌,对防治效果好的拮抗菌株进行发酵条件优化及抗病机理研究,研究结果如下:(1)从延边州不同烟草种植区采集的健康烟草中共分离出137株内生细菌,经平板对峙法初筛和发酵液复筛,筛选出一株对烟草炭疽病菌有显著拮抗效果的菌株C-4,其抑菌率为72.14%。通过培养形状、显微观察、生理生化及16S rDNA序列分析,最终