【摘 要】
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目的:骨髓间充质干细胞（Bone-derived mesenchymal stem cell,BMSC）治疗是椎间盘退变的一种治疗方式。但是,退变椎间盘组织微环境不利于BMSC的增殖、分化等生理活动,从而影响治疗效果。本研究旨在探究过表达SIRT6蛋白对骨髓间充质干细胞细胞活性的影响以及对椎间盘退变的治疗效果。方法:不同浓度tbhp（0,40,80,120μM）处理BMSC体外模拟退变椎间盘组织微
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目的:骨髓间充质干细胞（Bone-derived mesenchymal stem cell,BMSC）治疗是椎间盘退变的一种治疗方式。但是,退变椎间盘组织微环境不利于BMSC的增殖、分化等生理活动,从而影响治疗效果。本研究旨在探究过表达SIRT6蛋白对骨髓间充质干细胞细胞活性的影响以及对椎间盘退变的治疗效果。方法:不同浓度tbhp（0,40,80,120μM）处理BMSC体外模拟退变椎间盘组织微环境,CCK8细胞活性检测试剂和Calcein AM细胞活性检测试剂检测BMSC细胞活性和存活率,蛋白免疫印迹Western blot检测BMSC中SIRT6表达水平。过表达SIRT6的BMSC（SIRT6-BMSC）通过慢病毒转染获得,并将其与空病毒转染BMSC（NC-BMSC）作比较。蛋白免疫印迹Western blot检测NC-BMSC和SIRT6-BMSC中SIRT6表达水平。CCK8细胞活性检测试剂和Calcein AM细胞活性检测试剂分别检测0μM tbhp处理BMSC和80μM分别处理正常BMSC、NC-BMSC和SIRT6-BMSC细胞活性和存活率。按以下分组共培养髓核细胞（nucleus pulposus cell,NPC）和BMSC:单独培养NPC组;80μM tbhp处理NPC组;80μM TBHP处理NPC+NC-BMSC组;80μM TBHP处理NPC+SIRT6-BMSC组。CCK8细胞活性检测试剂、Calcein AM细胞活性检测试剂、蛋白免疫印迹Western blot、Annexin V-FITC细胞凋亡流式检测分别检测上述分组。动物实验验证:比较对照组、退变组、NC-BMSC移植组、SIRT6-BMSC移植组的椎间盘退变程度。结果:随着TBHP浓度递增,BMSC细胞活性和存活率、SIRT6表达水平递减。SIRT6-BMSC细胞活性和存活率优于NC-BMSC。SIRT6-BMSC与NPC共培养对NPC具有更佳的保护效果。影像学和组织学结果表明过表达SIRT6的BMSC对椎间盘退变具有更优越的治疗效果。结论:过表达SIRT6的BMSC细胞活性和存活能力增强,并且对椎间盘退变的治疗效果更佳。本研究为椎间盘退变的干细胞疗法提供了一种改良方法。
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