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目的：
为证实糖脂代谢的关键酶ACLY是否参与和调控UT-B缺失导致心肌细胞脂代谢紊乱过程。课题组前期研究发现，UT-B基因敲除可导致小鼠心脏发生代谢重构，UT-B基因敲除小鼠会出现心肌肥大的症状，并伴有不同程度房室传导阻滞，且随龄加重。另外，研究表明ACLY在一些脂代谢紊乱相关的疾病中表达异常，如肥胖、糖尿病。近年来，ACLY与心血管疾病相关机制的研究报道尚少。本研究旨在进一步证实UT-B在心肌能量代谢重构中的作用，并探索ACLY在高尿素和UT-B缺失所致心肌肥大中的表达和作用，明确ACLY参与UT-B基因缺失所致心肌细胞脂质代谢紊乱，进一步证实ACLY的表达可调控UT-B基因缺失导致心肌脂质代谢紊乱，从而影响心肌肥大的发生发展。
方法：
1）利用正常心肌细胞（H9C2），给予20mM尿素，建立高尿素细胞模型，，观察心肌细胞体积大小和脂质堆积情况，心肌肥大标志蛋白（ANP）和柠檬酸裂解酶（ACLY）的表达，以及细胞内总胆固醇、甘油三酯、高/低密度脂蛋白含量随时间的变化。
2）利用UT-B基因敲除的心肌细胞，建立UT-B缺失细胞模型，再通过异丙肾上腺素（ISO）处理后，观察负荷或刺激下UT-B缺失心肌细胞体积大小和脂质堆积情况，观察各组细胞心肌肥大标志蛋白（ANP）和柠檬酸裂解酶（ACLY）的表达，以及细胞内总胆固醇、甘油三酯、高/低密度脂蛋白含量随时间的变化。3）应用正常心肌细胞和UT-B缺失细胞模型，加入异丙肾上腺素（ISO）后，再分别通过转染shACLY和空载体，对比观察心肌心肌肥大标志蛋白（ANP）和柠檬酸裂解酶（ACLY）表达，以及细胞内总胆固醇、甘油三酯、高/低密度脂蛋白含量。
结果：
1）高尿素可促进心肌细胞发生脂质代谢紊乱，UT-B缺失更易导致心肌肥大发生。
免疫荧光实验结果显示，正常心肌细胞，尿素负荷后，细胞细胞体积明显增大（p＜0.05）；UT-B缺失细胞，给予ISO刺激后细胞体积增大更为明显。油红O染色实验结果显示，尿素负荷的正常心肌细胞出现脂滴蓄积；ISO刺激的UT-B基因缺失细胞中出现大量脂滴蓄积。
Western blotting实验结果显示，尿素负荷的正常心肌细胞和ISO刺激后UT-B基因缺失细胞的ANP和ACLY表达水平随时间增加呈上升趋势。
酶标仪检测分析结果显示，给予尿素负荷的正常心肌细胞与ISO处理的UT-B基因缺失细胞模型组心肌细胞总胆固醇、甘油三酯及高/低密度脂蛋白含量较对照组相比明显升高（p＜0.05）,呈现时间依赖性；其中低密度脂蛋白含量变化最为明显（p＜0.05）。
2）干预ACLY表达可调控UT-B基因缺失所导致的心肌肥大。
Western blotting实验结果显示，，与对照组相比，给予ISO处理后，正常心肌细胞和UT-B基因缺失细胞的ANP和ACLY表达水平较高（p＜0.05），且UT-B基因缺失细胞增加更为明显（p＜0.05）；与模型组比较，在转染ACLY-shRNA后细胞内ANP和ACLY显著下降（p＜0.05）。
酶标仪检测分析结果显示，与对照组相比，给予ISO处理后正常心肌细胞与UT-B基因缺失细胞模型组心肌细胞内总胆固醇、甘油三酯及高/低密度脂蛋白含量明显升高（p＜0.05），其中低密度脂蛋白含量增加最为明显（p＜0.05）；在转染ACLY-shRNA后含量显著下降；其中，低密度脂蛋白含量下降更为明显（p＜0.05）。
结论：
首先，证实了高尿素和UT-B基因缺失可导致心肌细胞脂质代谢紊乱；其次，明确了ACLY参与UT-B基因缺失所致心肌细胞脂质代谢紊乱；最后，干扰ACLY表达可调控UT-B基因缺失导致心肌脂质代谢紊乱，抑制心肌肥大的发生发展。
为证实糖脂代谢的关键酶ACLY是否参与和调控UT-B缺失导致心肌细胞脂代谢紊乱过程。课题组前期研究发现，UT-B基因敲除可导致小鼠心脏发生代谢重构，UT-B基因敲除小鼠会出现心肌肥大的症状，并伴有不同程度房室传导阻滞，且随龄加重。另外，研究表明ACLY在一些脂代谢紊乱相关的疾病中表达异常，如肥胖、糖尿病。近年来，ACLY与心血管疾病相关机制的研究报道尚少。本研究旨在进一步证实UT-B在心肌能量代谢重构中的作用，并探索ACLY在高尿素和UT-B缺失所致心肌肥大中的表达和作用，明确ACLY参与UT-B基因缺失所致心肌细胞脂质代谢紊乱，进一步证实ACLY的表达可调控UT-B基因缺失导致心肌脂质代谢紊乱，从而影响心肌肥大的发生发展。
方法：
1）利用正常心肌细胞（H9C2），给予20mM尿素，建立高尿素细胞模型，，观察心肌细胞体积大小和脂质堆积情况，心肌肥大标志蛋白（ANP）和柠檬酸裂解酶（ACLY）的表达，以及细胞内总胆固醇、甘油三酯、高/低密度脂蛋白含量随时间的变化。
2）利用UT-B基因敲除的心肌细胞，建立UT-B缺失细胞模型，再通过异丙肾上腺素（ISO）处理后，观察负荷或刺激下UT-B缺失心肌细胞体积大小和脂质堆积情况，观察各组细胞心肌肥大标志蛋白（ANP）和柠檬酸裂解酶（ACLY）的表达，以及细胞内总胆固醇、甘油三酯、高/低密度脂蛋白含量随时间的变化。3）应用正常心肌细胞和UT-B缺失细胞模型，加入异丙肾上腺素（ISO）后，再分别通过转染shACLY和空载体，对比观察心肌心肌肥大标志蛋白（ANP）和柠檬酸裂解酶（ACLY）表达，以及细胞内总胆固醇、甘油三酯、高/低密度脂蛋白含量。
结果：
1）高尿素可促进心肌细胞发生脂质代谢紊乱，UT-B缺失更易导致心肌肥大发生。
免疫荧光实验结果显示，正常心肌细胞，尿素负荷后，细胞细胞体积明显增大（p＜0.05）；UT-B缺失细胞，给予ISO刺激后细胞体积增大更为明显。油红O染色实验结果显示，尿素负荷的正常心肌细胞出现脂滴蓄积；ISO刺激的UT-B基因缺失细胞中出现大量脂滴蓄积。
Western blotting实验结果显示，尿素负荷的正常心肌细胞和ISO刺激后UT-B基因缺失细胞的ANP和ACLY表达水平随时间增加呈上升趋势。
酶标仪检测分析结果显示，给予尿素负荷的正常心肌细胞与ISO处理的UT-B基因缺失细胞模型组心肌细胞总胆固醇、甘油三酯及高/低密度脂蛋白含量较对照组相比明显升高（p＜0.05）,呈现时间依赖性；其中低密度脂蛋白含量变化最为明显（p＜0.05）。
2）干预ACLY表达可调控UT-B基因缺失所导致的心肌肥大。
Western blotting实验结果显示，，与对照组相比，给予ISO处理后，正常心肌细胞和UT-B基因缺失细胞的ANP和ACLY表达水平较高（p＜0.05），且UT-B基因缺失细胞增加更为明显（p＜0.05）；与模型组比较，在转染ACLY-shRNA后细胞内ANP和ACLY显著下降（p＜0.05）。
酶标仪检测分析结果显示，与对照组相比，给予ISO处理后正常心肌细胞与UT-B基因缺失细胞模型组心肌细胞内总胆固醇、甘油三酯及高/低密度脂蛋白含量明显升高（p＜0.05），其中低密度脂蛋白含量增加最为明显（p＜0.05）；在转染ACLY-shRNA后含量显著下降；其中，低密度脂蛋白含量下降更为明显（p＜0.05）。
结论：
首先，证实了高尿素和UT-B基因缺失可导致心肌细胞脂质代谢紊乱；其次，明确了ACLY参与UT-B基因缺失所致心肌细胞脂质代谢紊乱；最后，干扰ACLY表达可调控UT-B基因缺失导致心肌脂质代谢紊乱，抑制心肌肥大的发生发展。