制何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根的炮制加工品,具有补肝肾,益精血,乌须发,强筋骨,化浊降脂的功效,以独特的补益之功应用于临床。其炮制方法种类繁多,2020年版《中华人民共和国药典》收载了黑豆汁炖、清蒸和黑豆汁蒸制法,北京等地方炮制规范记载了黑豆汁黄酒蒸制法等。这些经由不同炮制方法加工而成的饮片均作为“制何首乌”同名饮片,应用于中药制剂和处方配伍等。然而,除炮制方法繁多外,各炮制规范中缺乏科学且统一的炮制参数,也是导致市场流通的制何首乌同名饮片质量参差不齐,临床有效性和安全性受到严重影响的重要原因之一。中药饮片的质量与其炮制过程中科学内涵（物质基础、生物活性等）的变化息息相关,基于此,阐明不同炮制方法制何首乌科学内涵变化的共性原理,有助于解释制何首乌同名饮片使用的科学性,可为其炮制工艺规范化,以及饮片质量控制等提供参考。因此,本课题基于物质基础共性变化规律,辅以由补肾为代表的药效研究,初步阐释黑豆汁炖、黑豆汁蒸、清蒸和黑豆汁黄酒蒸四种不同炮制方法制何首乌科学内涵变化的共性原理。采用黑豆汁炖/蒸、清蒸和黑豆汁黄酒蒸四种不同炮制方法,分别炮制24 h、32h、40h和48h,共16种制何首乌饮片为研究对象。采用HPLC-QTOF-MS技术对上述制何首乌饮片中的化学成分进行定性表征,将定性表征所得各化学成分的相对峰面积进行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）,筛选含量受炮制时间影响显著的化学成分,并将其按照化合物结构类别分别与炮制时间进行相关性分析。结果表明,通过对照品比对以及各类成分的质谱特征碎片信息推测,共鉴定出93个化合物,包括二苯乙烯类化合物25个,蒽醌类化合物17个,黄酮类化合物20个,鞣质类化合物13个,有机酸类化合物12个,以及其他化合物6个。PCA和OPLS-DA分析显示,不同炮制时间的制何首乌饮片区分明显,表明炮制时间对制何首乌饮片物质基础的影响较大;而相同炮制时间经不同方法炮制加工所得制何首乌饮片中,所含物质基础种类及相对峰面积均有相似性。根据VIP值＞1.0,P＜0.05,筛选出了 46个在不同炮制时间相对峰面积差异显著的化合物,含二苯乙烯类化合物14个,包括2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷;蒽醌类化合物9个,包含大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷;黄酮类化合物9个,鞣质类化合物6个,有机酸类化合物2个及其他化合物6个。随炮制时间延长,以2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为代表的二苯乙烯苷类成分含量逐渐降低,其裂解所得相应苷元的含量逐渐增多;蒽醌苷类和黄酮苷类成分含量的变化规律与其相似。但是,其中部分黄酮苷元,如二氢黄酮、异黄酮和查尔酮等由于热不稳定,在炮制过程中结构发生变化,含量呈先上升后下降的变化趋势。因此,不同结构类别的化合物含量变化具有各自特点,但四种不同炮制方法制何首乌饮片中各类化学成分的含量变化规律基本类似,具有共性特点。基于定性表征分析结果,选择46个含量差异显著的化合物中,与制何首乌药效密切相关的9个化学成分进行定量表征。采用HPLC-DAD法测定2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷5个化学成分的含量;紫外可见分光光度法测定多糖的含量;HPLC-ELSD法测定D-果糖、D-无水葡萄糖与蔗糖的含量。并绘制9个化学成分含量随炮制时间变化的折线图。结果表明,随炮制时间延长,不同炮制方法所得制何首乌饮片中二苯乙烯苷和蒽醌苷类成分含量逐渐降低,蒽醌苷元类成分含量变化不明显,与定性表征结果一致;多糖类成分含量逐渐升高,单糖和二糖类成分含量逐渐降低,糖类成分总含量呈上升趋势。基于定量表征结果,将聚类分析和熵权TOPSIS（Technique for order preference by similarity to ideal solution）模型相结合,进一步挖掘不同炮制方法制何首乌物质基础的共性变化规律,寻找不同制何首乌的共性炮制时间区间。聚类分析结果表明,炮制24 h和32 h的四种不同炮制方法制何首乌均可聚为—类,且炮制32 h时四种制何首乌饮片的熵权TOPSIS模型评分较高,表明该炮制时段饮片中的化学成分相对稳定,含量相近,且炮制效果较好,饮片质量较佳。因此,从物质基础角度分析,显示24～32h为四种不同炮制方法制何首乌的共性炮制区间,且该炮制时段饮片质量较佳。基于物质基础共性变化规律分析结果,以32 h作为炮制终点,并同时设置炮制不及、已过3个时间点,即以24 h、32 h和40 h的炮制时间饮片,共12个饮片,作为研究对象,以氢化可的松致肾虚小鼠模型为例,探寻四种不同炮制方法制何首乌治疗肾虚的共性规律,进一步从药效作用角度确证四种不同炮制方法制何首乌共性炮制区间的合理性及科学性。结果可知,不同制何首乌饮片给药后,除脾和胸腺指数外,其余指标均有所改善,且制何首乌对该肾虚模型小鼠的补肾作用主要体现于下丘脑-垂体-肾上腺/性腺轴,表明其作用机制可能与改善机体肾上腺功能和性功能相关。结合物质基础分析,推测制何首乌中的蒽醌类成分为补肾作用相关物质基础。因此,基于氢化可的松致肾虚小鼠模型,从补肾药效作用方面确证了 24～32h为四种不同炮制方法制何首乌的共性炮制区间和最佳炮制区间。综上,四种不同炮制方法制何首乌均可通过降低二苯乙烯苷类及蒽醌苷类等寒性成分含量而减弱偏性,通过增加糖类等补益成分含量而提高补肾作用。四种不同炮制方法炮制过程中主要物质基础的变化曲线基本类似,炮制到24～32 h时,不同制何首乌饮片中的主要活性成分含量相近,因此该时段是制何首乌物质基础的稳定区间;该稳定区间饮片对氢化可的松致肾虚小鼠的补肾药效作用基本相似,且药效最佳,可作为同名饮片使用。因此,四种炮制方法具有“归一”的可能。本研究为规范和简化制何首乌炮制工艺,稳定制何首乌饮片质量提供参考依据,对保障同名饮片应用于临床安全、有效具有重要意义。