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目的: 1.基于高通量测序方法建立糖尿病缺血型与非缺血型溃疡差异表达miRNAs网络;同时分析紫朱软膏治疗前后糖尿病缺血与非缺血型溃疡差异表达miRNAs,并据此进行生物信息学分析,寻找紫朱软膏促愈的可能作用靶点。 2.基于糖尿病溃疡大鼠模型及糖尿病足溃疡患者研究Wnt/β-catenin信号通路在糖尿病溃疡发病中的影响及紫朱软膏对此信号通路的干预作用。 方法: 第一部分:建立糖尿病缺血型与非缺血型溃疡大鼠模型。联合高脂饲料与STZ注射培养糖尿病模型,通过烫伤仪制备慢性溃疡模型,通过结扎股动脉及分支制备缺血模型,联合以上方法制备所需模型。通过高通量测序的方式,探寻糖尿病缺血型与非缺血型大鼠模型溃疡组织的miRNAs网络。同样方式检测以上两组应用紫朱软膏前后miRNAs的差异表达,进一步应用生物信息学分析,通过GO、KEGG方式预测靶基因及靶信号通路,得到两组共同目标通路为Wnt/β-catenin信号通路。 第二部分:将72只SD大鼠随机分为9组,即对照组(N)、普通非缺血型溃疡模型组(NU)、普通缺血型溃疡模型组(NIU),糖尿病非缺血型溃疡模型3组(DU1空白对照、DU2生长因子、DU3紫朱软膏),以及糖尿病缺血型溃疡模型3组(DIU1空白对照、DIU2生长因子、DIU3紫朱软膏)。通过空白组N、NU、NIU、DU1、DIU1,探讨Wnt/β-catenin信号通路在糖尿病溃疡愈合过程中的作用机理;通过DU、DIU各用药组(DU2、DU3,DIU2、DIU3),探讨中药紫朱软膏对Wnt/β-catenin信号通路及溃疡愈合过程中相关细胞因子的干预作用。 第三部分:随机选择糖尿病足溃疡患者,观察紫朱软膏的疗效及安全性评价,并讨论紫朱软膏对Wnt/β-catenin信号通路及溃疡愈合过程中相关细胞因子的干预作用。 结果: 1.糖尿病缺血与非缺血溃疡模型间存在miR-382-3p、miR-379-3p、miR-3571、miR-ib、miR-206-3p、miR-200b-3p、miR-200a-5p、miR-200b-5p、miR-204-5p及miR-135b-5p等48个差异性miRNAs,在糖尿病溃疡缺血与否的形成机制中可能扮演着重要角色; 2.糖尿病非缺血溃疡模型经紫朱软膏换药前后存在miR-431、miR-455-3p、miR-127-5p、miR-434-5p、miR-455-5p、miR-17-2-3p、miR-29c-3p、miR-378b、miR-223-3p及miR-20b-5p等80个差异性miRNAs;糖尿病缺血溃疡模型经紫朱软膏换药前后存在miR-379-3p、miR-496-3p、miR-434-5p、miR-411-5p、miR-122-5p、miR-1b、miR-1-3p、miR-133b-3p、miR-133a-3p及miR-133a-5p等122个差异性miRNAs;通过生物信息学分析方法预测Wnt信号通路可能是紫朱软膏促进糖尿病溃疡愈合的靶信号通路; 3.糖尿病溃疡大鼠模型愈合过程中伴随Wnt/β-catenin信号通路抑制,也伴随炎症反应持续、生长因子不足状态; 4.中药紫朱软膏能促进糖尿病溃疡大鼠模型愈合,可能与激活Wnt/β-catenin信号通路,改善炎症反应状态、增加局部生长因子有关;且紫朱软膏对非缺血型溃疡干预作用优于缺血型溃疡组; 5.中药紫朱软膏能促进糖尿病足溃疡患者愈合,对创面愈合相关细胞因子及Wnt/β-catenin信号通路也能起到正向调节作用,为中医药防治糖尿病足提供了客观依据。 结论: 1.高通量测序技术是中医药寻求作用寻求作用靶点的重要途径与手段。 2.糖尿病溃疡愈合过程中伴随Wnt/β-catenin信号通路抑制,可能是其难愈机制之一。 3.紫朱软膏能激活Wnt/β-catenin信号通路,可能是其促进糖尿病溃疡愈合的机制之一。 4.紫朱软膏能改善糖尿病溃疡愈合过程中炎症反应持续、生长因子不足的状态。