制何首乌多糖的分离纯化及其体外抗衰老活性研究

来源 :河南中医学院 河南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rockgubao
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目的:研究制何首乌精制多糖的初步结构和粗多糖的体外抗衰老活性,为何首乌多糖的临床应用提供了广阔的发展空间。  方法:(1)水提醇沉法得到制何首乌粗多糖RPMP,经sevage法除蛋白、双氧水脱色和DEAE-52及SephadexG-150柱层析纯化分离,分别用水和不同浓度氯化钠为洗脱溶液,苯酚硫酸法,在紫外490nm处检测,收集各组分,冷冻干燥,得到制何首乌精制多糖RPMP-a、RPMP-b和RPMP-c。(2)制何首乌精制多糖的初步结构分析。将得到的制何首乌精制多糖RPMP-a、RPMP-b和RPMP-c经高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定纯度和分子量,采用红外光谱测定了多糖的初步结构。(3)在细胞水平对制何首乌多糖进行体外过氧化氢诱导损伤保护作用的初步研究。采用MTT法观察PC12细胞和HepG2细胞形态和检测细胞存活率,采用Hochest33258荧光染色法和流式细胞术测定细胞凋亡率。  结果:(1)RPMP-a经HPGPC鉴定有杂质,纯度鉴定为非均一组分,RPMP-b和RPMP-c为均一组分;经HPGPC测定RPMP-c、RPMP-b、RPMP-c的分子量分别为:32796Dal、22750Dal和17019Dal;红外光谱测定了多糖的骨架结构。(2)制何首乌粗多糖能够提高PC12和HepG2细胞的存活率和抗凋亡。  结论:(1)制何首乌粗多糖的分离纯化和初步结构分析方法可行。(2)证明了制何首乌粗多糖的体外抗衰老活性。
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