第一部分:多巴胺D2/肾上腺素α2受体在神经病理性疼痛中枢敏化大鼠脊髓背角中的表达研究背景与目的神经病理性疼痛（Neuropathic Pain,NP）是由躯体感觉神经系统损伤或病变所致的以神经可塑性改变为基础的顽固性疼痛,发病率高,治疗难度大,经常伴有抑郁和睡眠障碍等,给病人带来极大的痛苦。由于其病因众多,表现各异,发病机制复杂,在临床的诊断和治疗中,都会面临巨大的困难。因此探索其发病机理,寻找治疗靶点是当前医务工作者的重要任务。随着对神经病理性疼痛的分子机制、细胞机制,尤其是在初级感觉神经元和脊髓水平的研究,积累了丰富资料。现在普遍认为,外周敏化是神经病理性疼痛发生的主要原因,是中枢敏化的基础。而脊髓以及丘脑、中脑水平的敏化,是神经病理性疼痛维持的重要因素。脊髓背角是疼痛的初级整合中心,也是神经病理性疼痛敏化的初级中枢。伤害性信息经外周神经感受器加工转化为电信号或化学信号后传递到这里,再经过进一步加工后上传到脊髓以上层面的高级中枢形成痛觉。脊髓背角的中枢敏化机制复杂,其中下行抑制系统和下行易化系统的失衡在神经病理性疼痛的发生、发展的过程中起着重要的作用。研究表明,下行抑制系统功能的减弱是导致失衡的重要原因,其主要因素是5-羟色胺和去甲肾上腺素缺乏引起的去抑制性作用,尤其是去甲肾上腺素。另外,除了去甲肾上腺素和5-羟色胺外,多巴胺在中枢敏化的过程中也起了重要作用。我们在前期临床研究工作中,采用射频治疗和药物针对以多巴胺功能障碍为主要原因的神经病理性疼痛进行治疗,取得了良好的治疗效果。在本研究中,我们采用脊神经结扎（Spinal nerve ligation,SNL）动物模型从行为学、病理学、蛋白表达及基因表达等方面观察神经病理性疼痛大鼠下行抑制系统中多巴胺D2/肾上腺素α2受体数量的改变,探讨两种受体在神经病理性疼痛发生及维持中的作用,为临床治疗提供帮助。研究方法将36只SD大鼠随机分为对照组、假手术组及模型组,其中模型组制作大鼠SNL模型。各组通过von Frey法检测大鼠的机械缩足反射阈值（mechanical withdrwal threshold,MWT）,热板试验检测缩爪潜伏期（paw withdrawal latency,PWL）进行行为学测试,观察神经病理性疼痛的发生、发展过程。采用坐骨神经HE染色切片观察神经损伤后,神经元细胞的变化。造模成功后,采用免疫印迹法（Western blot,WB）检测大鼠脊髓背角的多巴胺 D2 受体（dopamine receptor-2,Drd2）及肾上腺素 α2受体（adrenergic receptors-α2,Adrα2）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（Quantitative PCR,qPCR）技术检测大鼠脊髓背角中多巴胺D2受体及肾上腺素α2受体的基因表达水平。观察神经病理性疼痛发展和维持过程中两种受体的变化情况。结果1.大鼠SNL模型建立后,MWT及PWL明显下降,反映了典型的神经病理性疼痛的行为学表现,同时坐骨神经中神经元排列松散,出现神经元细胞损伤。相应的对照组、假手术组并未出现以上表现。2.相较于对照组和假手术组,SNL模型大鼠的多巴胺D2受体及肾上腺素α2受体蛋白明显下调。3.相较于对照组和假手术组,SNL模型大鼠的多巴胺D2受体及肾上腺素α2受体mRNA水平明显下调。第二部分:安非他酮对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角多巴胺及去甲肾上腺素浓度的影响研究背景与目的神经病理性疼痛是由躯体感觉系统损伤或疾病导致的疼痛,是一种由许多不同疾病或损害引起的综合征。神经病理性疼痛表现为一系列的症状和体征,涵盖了多种临床疾病,严重影响了患者的生活质量。神经病理性疼痛发病机制复杂。在众多机制中,下行抑制系统和下行易化系统的失衡起着重要的作用。研究表明,下行抑制系统和下行易化系统失衡的原因是抑制系统功能的减弱。参与这些通路的抑制性神经递质包括去甲肾上腺素、5-羟色胺、多巴胺等。正因为这些神经递质的参与,神经病理性疼痛患者常常伴有情绪和睡眠障碍等问题。在临床上,通常采用抗抑郁药进行治疗,主要包括三环类抗抑郁药和去甲肾上腺素/5-羟色胺再摄取抑制剂。安非他酮是第二代非三环类抗抑郁药,是去甲肾上腺素和多巴胺再摄取抑制剂,对毒蕈碱受体、组胺能受体或肾上腺素能受体没有显著的亲和力,其作用靶点和不良反应与其他抗抑郁药有很大不同,是一个新的治疗用药。在本研究中,我们采用了 SNL动物模型来模拟神经病理性疼痛。从行为学、病理学、脊髓背角去甲肾上腺素及多巴胺浓度等方面来探讨安非他酮的镇痛效果及其在神经病理性疼痛治疗中的作用机制,为其临床运用提供理论依据。研究方法将30只健康成年雄性SD大鼠随机分成5组,即对照组、假手术组、模型组、治疗组及药物对照组,其中模型组与治疗组制作大鼠SNL模型,治疗组在模型组基础上每天灌胃安非他酮38mg/kg;药物对照组不进行任何造模处理,每天灌胃安非他酮38mg/kg。所有大鼠通过von Frey法检测大鼠的MWT,热板试验检测PWL进行行为学测试,观察神经病理性疼痛的发生、发展过程及治疗效果。采用坐骨神经HE染色切片观察神经损伤后治疗与不予以治疗情况下神经元细胞的变化。造模成功后,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）法检测大鼠脊髓背角组织中多巴胺、去甲肾上腺素水平。观察安非他酮治疗神经病理性疼痛可能的作用机制。结果1.大鼠SNL模型建立后,模型组与治疗组MWT及PWL明显下降,反映了典型的神经病理性疼痛的行为学表现。2.正常组、假手术组与药物对照组大鼠坐骨神经组织神经元排列结构完整,未出现明显病理学变化。模型组大鼠坐骨神经中神经元排列松散,并出现神经元细胞损伤,治疗组大鼠坐骨神经组织病理学也出现神经元细胞损伤,但变化较模型组减轻3.相较于正常组、假手术组与药物对照组,模型组和治疗组大鼠的多巴胺及去甲肾上腺素水平明显下调,但治疗组的递质水平高于模型组。结论1.SNL模型引起的神经病理性疼痛导致了脊髓背角多巴胺D2受体及肾上腺素α2受体下调,揭示两种受体可能参与了神经病理性疼痛的发生和发展过程。2.安非他酮对神经损伤所致神经病理性疼痛具有明显的镇痛作用。其作用机理可能与增加脊髓背角多巴胺与去甲肾上腺素浓度有关。综上所述,安非他酮作为第二代非三环类抗抑郁药,对神经病理性疼痛临床治疗具有良好的潜在应用价值。