【摘 要】
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目的探讨GPSM1（G-protein signaling modulator 1）与MMP19（Metalloproteinases19）在结直肠癌中表达改变促进结直肠癌增殖及转移的相关分子机制。方法采用Western blot及免疫组织化学的方法检测GPSM1及MMP19在结直肠癌组织中的表达情况;结合TCGA数据库、免疫荧光及免疫共沉淀法分析GPSM1与MMP19之间是否存在相互作用;构建稳
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目的探讨GPSM1（G-protein signaling modulator 1）与MMP19（Metalloproteinases19）在结直肠癌中表达改变促进结直肠癌增殖及转移的相关分子机制。方法采用Western blot及免疫组织化学的方法检测GPSM1及MMP19在结直肠癌组织中的表达情况;结合TCGA数据库、免疫荧光及免疫共沉淀法分析GPSM1与MMP19之间是否存在相互作用;构建稳定过表达及敲低GPSM1与MMP19的结直肠癌细胞系,采用Transwell和划痕实验检测癌细胞的迁移和侵袭能力;CCK8及克隆形成实验检测癌细胞的增殖活性;流式细胞术检测癌细胞凋亡情况;将稳定降表达MMP19的RKO细胞注射到裸鼠腋下构建裸鼠皮下成瘤模型,检测MMP19表达下降对肿瘤增殖能力的影响;通过Western blot及q PCR检测GPSM1与MMP19对上皮-间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）及Caspase3/Bcl-2/Bax信号通路相关蛋白表达的影响。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织中GPSM1与MMP19的表达均上调（P＜0.05）,且二者表达呈正相关（P＜0.001）。免疫荧光结果显示GPSM1与MMP19共定位于结直肠癌细胞质。在结直肠癌细胞系中过表达或降表达GPSM1导致MMP19表达升高或降低,反之,过表达或敲低MMP19导致GPSM1表达升高或降低,提示二者在结直肠癌细胞中存在同升共降的关系。免疫共沉淀结果显示,GPSM1与MMP19可能存在相互作用。沉默GPSM1或MMP19后结直肠癌细胞系的增殖、迁移和侵袭能力降低,而过表达GPSM1或MMP19后细胞的增殖、迁移和侵袭能力增加。沉默MMP19能够逆转GPSM1对细胞迁移的促进作用,同样,沉默GPSM1也能够逆转MMP19对细胞迁移的促进作用。裸鼠体内成瘤实验证明干扰MMP19后肿瘤细胞增殖能力降低。过表达GPSM1或MMP19后EMT相关蛋白E-Cadherin表达降低,N-Cadherin、Vimentin及Snail表达升高,干扰GPSM1或MMP19后EMT相关蛋白表达趋势相反;干扰MMP19可以逆转GPSM1过表达对EMT的激活作用。过表达GPSM1或MMP19后促凋亡蛋白Cleaved-Caspase3及Bax表达降低,抑制凋亡蛋白Bcl-2水平升高,Caspase3的总蛋白水平无明显变化;而沉默GPSM1或MMP19后CleavedCaspase3及Bax表达升高,Bcl-2蛋白水平降低,Caspase3的总蛋白水平无明显变化。结论GPSM1与MMP19在结直肠癌中表达上调,二者相互作用促进结直肠癌细胞EMT;GPSM1与MMP19可能通过激活Caspase3/Bcl-2/Bax信号通路从而抑制结直肠癌细胞凋亡,促进细胞增殖。
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