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目的:三叉神经痛(Trigeminal neuralgia,TN)是一种常见的颅内神经病变,作为神经病理性疼痛(Neuropathic pain,NP)的一种类型,它严重影响着患者的身心健康。然而,三叉神经痛的病理机制十分复杂,目前临床上一些传统药物治疗以及手术治疗方案对疼痛的缓解均存在一定的局限性,所以,针对三叉神经痛的新的治疗方案已成为目前的研究热点。近年来,干细胞相关移植治疗被证实是一种有效的缓解神经病理性疼痛的策略。脱落乳牙干细胞(Stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)提取于人脱落的乳牙牙髓,其提取方法简易且无创,不涉及伦理问题。相关研究表明,脱落乳牙干细胞能够缓解大鼠三叉神经痛,但有关其缓解疼痛的具体机制仍不明确。同时现有研究表明干细胞对内质网应激(ER stress)有一定的调控作用,且内质网应激已被证实参与了周围神经病理性疼痛的发生发展。本实验通过压迫性损伤大鼠眶下神经建立动物三叉神经痛模型及体外PC12细胞内质网应激模型进行相关实验研究。在动物实验中,通过局部移植SHED观察大鼠机械疼痛阈值的变化情况;同时检测神经结扎后,三叉神经神经节细胞内内质网形态的变化以及神经周围炎性细胞浸润的变化情况;探究SHED在局部移植后能否调节三叉神经节(Trigeminal ganglion,TG)里内质网应激的标志分子胱天蛋白酶12(Caspase12)和氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表达。在体外实验中,通过衣霉素刺激PC12神经元细胞建立体外内质网应激模型,通过SHED与PC12细胞进行共培养的方式明确SHED能否缓解PC12细胞的内质网应激,明确SHED是否能够通过抑制PC12细胞中内质网应激的标志分子重链结合蛋白Bi P来达到减缓内质网应激反应的目的,从而为三叉神经痛的治疗提供新思路。方法:动物实验:1、原代SHED分离培养。2、通过眶下神经结扎方式建立三叉神经痛大鼠模型,测量大鼠机械疼痛阈值。3、观察SHED的局部移植对大鼠机械痛阈的影响,并分别在注射前和注射后3、7、14天的时间点对大鼠的机械疼痛阈值使用Von Frey纤维丝测量。4、观察神经结扎前后TG中内质网形态变化。5、HE染色观察神经结扎前后的周围炎症反应变化。6、检测神经结扎后TG中JNK m RNA水平的变化;Caspase12 m RNA和蛋白水平的变化。7、检测局部SHED移植后TG中JNK m RNA水平的变化;Caspase12 m RNA和蛋白水平的变化。体外细胞实验:1、衣霉素刺激PC12细胞建立体外内质网应激模型后,采用Hoechst 33342/PI双染色在荧光显微镜下观测细胞膜损伤情况。2、检测单纯衣霉素刺激后PC12细胞中Bi P在m RNA水平和蛋白水平的变化。3、检测SHED与PC12共培养后,衣霉素刺激的PC12细胞内Bi P m RNA和蛋白水平的变化。结果:动物实验:1、SHED被成功分离提取,镜下可见细胞呈长梭形贴壁生长。2、大鼠三叉神经痛模型建立成功。相比于假手术组,手术结扎组大鼠机械痛阈数值在术后1、3、7、14天后显著降低(P<0.01)。3、局部移植SHED后,机械疼痛阈值被逆转。SHED组和PBS组比较,在注射后3、7、14天,机械疼痛阈值显著升高(P<0.01)。4、相比于假手术组,手术结扎组TG电镜下内质网形态发生明显肿胀。5、与假手术组比较,手术结扎组神经周围有明显的炎性反应。HE染色结果表明对照组大鼠三叉神经结构正常,不伴有炎性细胞浸润;手术结扎组可见炎性细胞浸润明显增加。6、神经结扎后JNK和Caspase12在术侧TG中表达增加。手术结扎组大鼠相比于假手术组在术后14天,JNK m RNA(P=0.001),Caspase12 m RNA(P=0.006)及Caspase12蛋白(P=0.005)的表达上调。7、局部移植SHED后,JNK和Caspase12的表达在术侧TG中存在逆转现象。SHED移植后14天,JNK m RNA(P=0.004),Caspase12 m RNA(P=0.001)及Caspase12蛋白(P=0.009)表达被明显抑制。体外细胞学实验:1、Hoechst33342/PI双染法观察细胞形态,TM组细胞膜损伤导致通透性增加,PI则能够穿透细胞膜到达核内,与DNA结合后进而显示红色荧光的阳性细胞增多(P=0.001),SHED组细胞的胞膜损伤有所减轻,表现为镜下带红色荧光的阳性细胞显著减少(P=0.005)。2、经衣霉素刺激处理的PC12细胞中Bi P m RNA(P=0.033)及Bi P蛋白(P=0.01)的表达水平升高。3、SHED作用于PC12细胞后,经衣霉素刺激处理的PC12细胞中Bi P m RNA(P=0.013)及Bi P蛋白(P=0.006)的表达水平被抑制。结论:在本实验构建的三叉神经痛模型中,局部移植SHED可提高神经结扎大鼠机械疼痛阈值,减轻疼痛;神经结扎后TG中内质网形态改变,发生肿胀;局部炎性细胞浸润增多;在体外细胞共培养模型中,SHED能够缓解衣霉素刺激造成的细胞膜损伤。SHED缓解TN的作用机制可能与其抑制Caspase12、Bi P和JNK的表达上调进而抑制内质网应激反应相关。