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大理石花纹作为评定牛肉质量的重要指标,其越丰富,表明牛肉的肌内脂肪含量越高,牛肉品质也更优异。血管生成素样蛋白家族(ANGPTLs)是一类重要的分泌蛋白,参与血管生成,伤口修复,脂质代谢,葡萄糖代谢等生理过程。其中ANGPTL3、ANGPTL4、ANGPTL8均在甘油三酯代谢中发挥重要作用。ANGPTL4通过抑制脂蛋白脂酶的活性,控制进入脂肪细胞的甘油三酯的沉积,进而达到促进脂肪动员抑制贮存的作用。研究表明牛ANGPTL4基因已成为与肉质及生长性状相关的重要候选基因。随着功能研究的日渐完善,我们却发现尚未有关于牛ANGPTL4基因转录调控的研究报道。因此,本研究以西北农林科技大学选育的秦川肉牛肉用新品系(以下简称“秦川肉牛”)为研究对象,在细胞水平上探究了ANGPTL4基因转录调控机制,取得了以下试验结果:1.秦川肉牛ANGPTL4基因的组织表达规律。q RT-PCR用于检测ANGPTL4在24月龄牛不同组织和器官中的m RNA表达水平。其中,肝脏的相对表达量最高(P<0.01),其次为皮下脂肪组织,而在皱胃和脾组织的表达水平最低。2.确定了秦川肉牛ANGPTL4基因转录起始位点。采用5’末端c DNA快速扩增法确定了牛ANGPTL4基因有三个不同的5’末端,分别位于翻译起始位点(ATG)上游210、206和187 bp。本试验将靠近5’非翻译区(UTR)的鸟嘌呤残基(G)记为+1,与已报道ANGPTL4m RNA序列(NM＿001046043.2)转录起始位点相比,该位点向前推进了18 bp。3.确定了秦川肉牛ANGPTL4基因启动子最小功能区。通过PCR克隆获得了七个牛ANGPTL4基因启动子5’单向缺失片段,转染细胞后发现,当启动子从-568 bp缩短到-261bp时,双荧光素酶活性下降幅度最大,约为46%(P<0.01),表明牛ANGPTL4基因核心转录调控区位于-568～-261 bp上。4.转录因子GR和FOXA1是秦川肉牛ANGPTL4基因转录的必要正调控元件。通过在线软件对ANGPTL4基因核心启动子区潜在的转录因子结合位点进行分析,找到两个重要的转录因子GR和FOXA1。分别突变GR和FOXA1的结合位点后,双荧光素酶系统检测到启动子活性分别降低了38%和31%(P<0.01)。RNA干扰实验表明,当p GL3-568/+35分别和si-GR、si-FOXA1共转染后,双荧光素酶活性分别降低了46%和45%(P<0.05)。体外EMSA进一步证实了GR和FOXA1与ANGPTL4基因启动子的特异性结合。以上结果表明转录因子GR和FOXA1是维持牛ANGPTL4基因启动子基本转录活性的必要正调控元件。此外,沉默GR和FOXA1基因可降低牛ANGPTL4基因的m RNA表达水平(P<0.05)。综上所述,转录因子GR和FOXA1通过结合到秦川肉牛ANGPTL4基因启动子核心区域而对其转录活性发挥正调控作用。我们的结果为进一步研究ANGPTL4基因的调控机制奠定基础,并为提高牛肉质量提供参考。