【摘 要】
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目的:和枢消积丸是西南医科大学附属中医医院汪静教授多年来治疗原发性肝癌的经验方,在长期临床中我们发现,该方能显著减缓肝癌的进展、提高患者生存率,临床疗效明确,然而其治疗HCC的机制尚不明确。本研究以人肝癌细胞系HepG2为研究对象,通过体外实验,探讨和枢消积丸对HepG2细胞增殖凋亡的影响,揭示其治疗肝癌的潜在机制,为和枢消积丸临床运用提供科学的理论基础,为中西医结合治疗肝癌提供新思路。方法:1、
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目的:和枢消积丸是西南医科大学附属中医医院汪静教授多年来治疗原发性肝癌的经验方,在长期临床中我们发现,该方能显著减缓肝癌的进展、提高患者生存率,临床疗效明确,然而其治疗HCC的机制尚不明确。本研究以人肝癌细胞系HepG2为研究对象,通过体外实验,探讨和枢消积丸对HepG2细胞增殖凋亡的影响,揭示其治疗肝癌的潜在机制,为和枢消积丸临床运用提供科学的理论基础,为中西医结合治疗肝癌提供新思路。方法:1、体外培养HepG2细胞,使用CCK-8实验检测不同浓度和枢消积丸对肝癌细胞活性的影响,筛选合适药物浓度用以后续实验。2、联合应用CCK-8实验、平板克隆实验检测和枢消积丸对HepG2细胞增殖的影响。3、联合应用细胞划痕实验、Transwell侵袭及迁移实验检测和枢消积丸对HepG2细胞侵袭能力及迁移能力的影响。4、采用Annexin v-FITC/PI流式细胞术检测和枢消积丸对HepG2细胞坏死、凋亡的影响。5、采用Western blot检测和枢消积丸对NS5ATP13、Bcl 2、Bax及AKT/GSK/MTOR相关通路蛋白表达水平的影响。5、采用Real-time PCR检测和枢消积丸对NS5ATP13在m RNA上表达的影响。结果:1、与对照组相比,和枢消积丸可使HepG2细胞活性、增殖率、细胞愈合率、侵袭率及迁移率显著降低（P＜0.05）,其抑制能力呈浓度依赖性。2、Annexin v-FITC/PI流式细胞术结果显示和枢消积丸可以浓度依赖的方式促进HepG2细胞凋亡（P＜0.05）。3、Western blot检测结果显示,和枢消积丸干预后可上调HepG2细胞细胞中Bax蛋白表达,下调Bcl 2及p-Akt、p-GSK、p-MTOR的蛋白表达水平（P＜0.05）。4、Real-time PCR结果显示和枢消积丸可降低HepG2细胞中NS5ATP13在m RNA及蛋白水平的表达（P＜0.05）。结论:和枢消积丸可以抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与和枢消积丸抑制NS5ATP13的表达,继而抑制AKT/GSK/mTOR信号活化有关。
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