麻疹是由麻疹病毒（measles virus）感染引起的高度传染性疾病,主要通过呼吸道飞沫传播,人感染麻疹病毒后会出现类似感冒发热的临床症状,可伴有结膜炎、咳嗽、口腔黏膜斑或皮疹,严重者可并发脑炎甚至死亡。麻疹与风疹（Rubella）、寨卡病毒病（Zika virus disease）、B19病毒感染等疾病有相似的临床症状,且目前无特效治疗药物。得益于麻疹疫苗的接种,麻疹的发病率大大下降,2000—2017年间全世界麻疹死亡人数降低了73%。但近年来,疫情出现了复苏的迹象,全球多个国家和地区出现了麻疹疫情的大规模暴发,2018年,大约14万人死于麻疹,2019年报告的病例数达到23年来的最高记录,2020年,26个国家暴发重大麻疹疫情。为了防止传染病疫情输入,我国在口岸开展麻疹监测。快捷灵敏的检测方法有助于在入境口岸迅速排查麻疹病毒感染者,防止输入性病例引发的国内疫情,真正做到“筑牢口岸检疫防线”,对于麻疹的监测、疫情的防控具有重要的意义。目的:建立一种快速检测麻疹病毒Ig M抗体的磁珠富集检测一体化免疫层析法。方法:1、首先建立麻疹病毒Ig M抗体胶体金免疫层析法。以羊抗人Ig M单克隆抗体划硝酸纤维素膜,作为检测线,兔抗麻疹病毒核蛋白多克隆抗体作为质控线,胶体金偶联麻疹病毒核蛋白,喷膜,干燥,作为结合垫,组装成免疫层析试纸条,同时对检测线包被抗体浓度、胶体金最佳蛋白偶联量、最佳偶联p H等条件进行优化。2、在胶体金免疫层析的基础上建立麻疹病毒Ig M抗体磁珠富集检测一体化免疫层析法。通过层析效果以及磁响应性测试筛选纳米磁珠,用EDC/NHS法将麻疹病毒核蛋白与磁珠相偶联,检测线包被羊抗人Ig M单克隆抗体,并优化检测线抗体浓度以及免疫磁珠对待测物的捕获时间、磁分离时间,同时考察了免疫磁珠用量对免疫层析效果的影响。3、以商品化ELISA法为标准,用胶体金免疫层析法与磁珠富集检测一体化免疫层析法对麻疹病毒Ig M抗体阳性血清进行检测,比较两种检测方法的灵敏度。并对甲型/乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒抗体阳性血清和麻疹Ig M抗体阴性血清进行检测,评价检测方法的特异性。用所建立的方法与商品化ELISA法同时检测临床血清样本,通过对检测结果的比较分析,评价所建立方法的应用价值。结果:1、胶体金免疫层析法检测线最佳抗体划膜浓度为2μg/μl,1ml胶体金蛋白偶联量为6μg,偶联p H为8.3,1ml胶体金所需封闭蛋白量为30μl的10%BSA;2、磁珠富集检测一体化免疫层析法质控线最佳划膜浓度为1.5μg/μl,免疫磁珠用量为10μl/反应,免疫磁珠对麻疹病毒核蛋白Ig M抗体的捕获时间为20min,磁力分离最优时间为5min。3、胶体金免疫层析法、磁珠富集检测一体化免疫层析法同时检测80份健康体检者血清,检测结果均与实际相符,阴性符合率为100%,且与甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体均无交叉反应。对麻疹Ig M抗体阳性样本的检测结果表明,胶体金免疫层析法能检测出的阳性样本对应ELISA法的COI为2.815,阳性符合率为75%,磁珠富集检测一体化免疫层析法则能检测出COI为1.65的阳性样本,阳性符合率为100%。后者比前者的灵敏度约提高10倍,与ELISA法相接近。结论:1、本研究首次建立了检测麻疹Ig M抗体的磁珠富集检测一体化免疫层析法,比胶体金免疫层析法灵敏度约提高一个数量级,特异性与灵敏度几乎与ELISA相当,但用时比ELISA大大缩短,操作更简单。2、通过对临床样本检测证实了磁珠富集检测一体化免疫层析法的实用性。该方法弥补了传统的胶体金免疫层析法敏感性较低,PCR、ELISA需要大量时间的不足,具备在口岸或基层对麻疹进行检测检疫的推广前景。