固定化金属离子亲和磁性固相萃取法分离富集核苷类成分

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核苷类化合物主要包括碱基、核苷和核苷酸,具有多种生理功能和药理活性。但是由于样品的来源复杂以及核苷类化合物含量低等情况在一定程度上影响了分析检测的准确性和灵敏度,所以需要对样品进行适当的前处理以提高分析方法的性能。本论文基于固定化金属离子亲和色谱(IMAC)和磁性固相萃取(MSPE)技术,制备不同金属离子功能化磁性吸附剂用于核苷类化合物的样品前处理,并应用于中药、食品和生物样品中的碱基、核苷和核苷酸类化合物的分离富集研究。论文主要包含五个部分:第一部分为文献综述,首先介绍MSPE的基本原理,功能化磁性吸附剂的发展及应用,IMAC及其相关研究进展;其次对核苷类化合物的生理和药理作用以及样品前处理方法进行总结;最后提出本论文研究的目的、意义和主要内容。第二部分为制备Fe3O4@PDA@Ti4+核壳结构的磁性颗粒用于冬虫夏草和香菇中单磷酸核苷的选择性萃取研究。通过比较Ti4+、Zr4+、Fe3+、Al3+、Cu2+、Zn2+、Mg2+和Ni2+固定化的Fe3O4@PDA磁性材料对五个单磷酸核苷的萃取效果,筛选出Ti4+为最佳金属离子并对合成的材料进行表征;然后对影响单磷酸核苷萃取和洗脱效率的参数进行优化并进行方法学验证,得到线性相关系数均大于0.9999,检测限为4.7-14.1 ng/mL;最后将该方法应用于冬虫夏草、蛹虫草和干香菇中核苷酸的选择性萃取和定量检测,其加样回收率为76.9%-108.3%。结果表明该磁性吸附剂具有稳定性好、分离快速、检测限低等优点,可用于选择性萃取复杂样品基质中含磷酸根类的化合物。第三部分为合成Fe3O4@PDA@Cu2+磁性微球对血浆中嘌呤类物质的萃取富集研究。首先通过优化醋酸铜溶液反应时间和反应浓度,制备Cu2+负载量最大的磁性吸附剂并进行表征确认;然后考察不同条件对四个嘌呤化合物的萃取和洗脱效率的影响,在最优条件下进行方法学验证,其线性相关系数均大于0.9983,检测限为0.42-2.15 ng/mL,定量限为1.41-6.50 ng/mL,日内精密度和日间精密度分别为1.4%-5.6%和4.6%-7.0%;最后将该方法应用于家兔血浆中嘌呤类化合物的定量分析,其加样回收率为70.0%-102.4%,通过与其他嘌呤类化合物前处理方法的比较,该方法具有吸附剂制备较为简单、分离快速、回收率较高等特点,可用于生物样品中嘌呤类化合物的分离富集。第四部分为制备亲水性植酸(PA)-Ti4+功能化的磁性氧化石墨烯纳米颗粒用于碱基、核苷和核苷酸的萃取研究。首先表征确认合成的MagGO@PEI@PA@Ti4+磁性纳米复合吸附剂;然后分别在固定化金属离子亲和色谱(IMAC)和亲水相互作用色谱(HILIC)两种模式下,对四个核苷酸、五个碱基和核苷的萃取和洗脱条件进行优化,并分别进行方法学的验证;最后,在IMAC和HILIC模式下,实现对冬虫夏草、干香菇和家兔血浆样品中的碱基、核苷和核苷酸的同时萃取研究。结果表明,基于MagGO@PEI@PA@Ti4+磁性吸附剂的MSPE-HPLC-UV方法为复杂样品中核苷类化合物的分析提供了一种可靠的样品前处理方法。第五部分为总结和展望。通过本论文的研究,将固定化金属离子亲和磁性固相萃取技术成功应用于中药、食品和生物样品中核苷类化合物的分离富集研究。基于固定化金属离子亲和色谱(IMAC)和磁性固相萃取(MSPE)技术的结合,可以作为一种有效的样品前处理方法用于复杂样品基质中核苷类化合物以及其他类似物的分离富集研究。
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