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目的:研究胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase,CBS）在食管鳞癌淋巴结转移过程中的作用及其机制,探索食管鳞癌淋巴结转移的新型机制,以期为食管鳞癌的有效治疗提供新思路与新靶点。方法:第一部分,CBS表达与食管鳞癌淋巴结转移的关系研究:应用人食管鳞癌组织芯片,采用免疫组化检测癌及癌旁组织中CBS的表达水平并分析CBS表达与食管鳞癌临床病理特征的关系;Western blot检测人食管鳞癌和癌旁组织、食管鳞癌细胞及正常食管上皮细胞中CBS的表达水平。第二部分,CBS/H2S体系体外促食管鳞癌淋巴结转移作用研究:采用CBS si RNA下调食管鳞癌KYSE450细胞中CBS水平,采用CBS过表达质粒上调Eca109细胞中CBS水平,应用MTS、Ed U、细胞划痕、Transwell及流式细胞术、内皮细胞成管实验检测下调或上调CBS表达水平对食管鳞癌细胞生长、增殖、迁移、侵袭、凋亡、血管生成及淋巴管生成的影响。第三部分,CBS/H2S体系体内促食管鳞癌淋巴结转移作用研究:采用LV-CBS-RNAi慢病毒感染人食管鳞癌KYSE450细胞构建CBS稳定下调的细胞模型,以慢病毒包装的空载体感染的KYSE450细胞为对照模型;用构建成功的上述细胞模型建立裸鼠淋巴结转移动物模型;检测瘤体积、瘤重、淋巴结大小以分析下调CBS表达对裸鼠移植瘤的生长及淋巴结大小的影响;免疫组化分析CBS表达下调对裸鼠瘤组织中血管生成标记物CD34和淋巴管生成标记物LYVE1的影响;HE染色分析CBS表达下调对裸鼠移植瘤淋巴结转移的影响;第四部分,CBS/H2S体系促食管鳞癌淋巴结转移作用机制研究:采用Western blot检测不同CBS表达水平对人食管鳞癌细胞及动物瘤组织中SIRT1/Notch1/Hes1和VEGF/VEGF-C/VEGF-D表达水平的影响;采用CBS抑制剂氨基氧乙酸（Aminooxyacetic acid,AOAA）和CBS激活剂S-腺苷甲硫氨酸（S-Adenosylmethionine,SAM）分别处理KYSE450细胞和Eca109细胞24 h,亚甲基蓝法检测细胞中内源性H2S的释放,Western blot检测SIRT1的蛋白表达,WST-8法检测NAD+/NADH比例,以进一步探讨CBS/H2S体系对SIRT1的调控机制。结果:1、组织芯片的免疫组化结果显示,CBS在食管鳞癌组织中的表达普遍高于癌旁组织;CBS的表达与食管鳞癌的TNM分期及N转移呈正相关;在伴随淋巴结转移的癌组织中CBS表达高于非淋巴结转移的癌组织。2、Western blot结果显示,CBS在食管鳞癌组织中的表达水平高于癌旁组织,在伴有淋巴结转移癌组织中的表达高于非淋巴结转移癌组织,CBS在多数食管鳞癌细胞中呈高表达。3、下调食管鳞癌KYSE450细胞中CBS表达水平可抑制细胞的生长、增殖、迁移、侵袭、血管生成和淋巴管生成,而对细胞凋亡无明显影响;上调食管鳞癌Eca109细胞中CBS表达水平,可促进细胞的生长、增殖、迁移、侵袭、血管生成和淋巴管生成,但对细胞凋亡无明显影响。4、CBS下调会明显抑制裸鼠移植瘤的生长,减小淋巴结的大小,降低淋巴结的重量;裸鼠移植瘤组织免疫组化结果显示,CBS下调后能明显抑制CD34和LYVE1的表达;裸鼠淋巴结HE染色结果显示,下调CBS的表达可抑制食管鳞癌的淋巴结转移。5、Western blot检测结果显示,下调CBS表达可降低KYSE450细胞中VEGF、VEGF-C和VEGF-D蛋白水平,上调CBS表达可促进Eca109细胞中VEGF、VEGF-C和VEGF-D蛋白表达;下调CBS表达可降低裸鼠移植瘤组织中VEGF、VEGF-C和VEGF-D蛋白水平。6、Western blot结果显示,下调CBS表达可降低人食管鳞癌细胞KYSE450中SIRT1蛋白表达水平,同时升高Notch1、Hes1蛋白的表达水平;上调CBS的表达可增加食管鳞癌细胞Eca109中SIRT1蛋白的表达水平,同时降低Notch1、Hes1蛋白表达水平;下调CBS表达可降低裸鼠移植瘤组织中SIRT1蛋白表达水平,同时升高Notch1、Hes1蛋白的表达水平。7、亚甲基蓝实验结果显示,CBS抑制剂AOAA可减少KYSE450细胞中内源性H2S的释放,CBS激活剂SAM可增加Eca109细胞中内源性H2S的释放。8、Western blot结果显示,CBS抑制剂AOAA可抑制KYSE450细胞中SIRT1的表达,CBS激活剂SAM可促进Eca109细胞中SIRT1的表达。9、WST-8结果显示,CBS抑制剂AOAA可减少KYSE450细胞中NAD+/NADH比例,CBS激活剂SAM可增加Eca109细胞中NAD+/NADH比例。结论:1、CBS的表达与食管鳞癌淋巴结转移呈正相关。2、CBS高表达可促进食管鳞癌的淋巴结转移。3、CBS通过调控VEGF/VEGF-C/VEGF-D水平促进血管生成和淋巴管生成,进而促进食管鳞癌的淋巴结转移。4、CBS通过调控SIRT1/Notch1/Hes1信号通路促进食管鳞癌的淋巴结转移。5、CBS通过释放H2S来增加细胞内NAD+水平进而激活SIRT1。