SAPCD2基因对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡作用的研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shenzhixian
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
[目 的]探讨SAPCD2基因在T24膀胱癌细胞中的表达水平,以及SAPCD2基因后对膀胱癌T24细胞的影响。[方 法]采用实时荧光定量PCR的方法检测SAPCD2基因在膀胱癌T24细胞和5637细胞中mRNA的表达量。用T24膀胱癌细胞系进行实验室细胞实验。靶基因干扰RNA以制备慢病毒载体。采用慢病毒感染膀胱癌细胞。使用实时定量PCR检测膀胱癌细胞中的SAPCD2mRNA的表达量,确定靶基因的敲减效果。观察经慢病毒感染膀胱癌T24细胞3天后,SAPCD2干扰组与对照组膀胱癌细胞数目随时间变化。慢病毒感染膀胱癌T24细胞,培养5天后,采用噻唑兰处理4小时,比较实验组与对照组在吸光值(490nm)的变化,并分析是否具有时间依赖性。shRNA慢病毒感染T24细胞,培养5天后,通过流式细胞术检测shSAPCD2组与对照组(shCtrl)的细胞凋亡。采用Caspase3/7检测细胞凋亡情况。蛋白质印迹法用于检测靶基因在细胞中敲低后的蛋白表达,然后确定靶的干扰作用。[结 果]SAPCD2基因在T24和5637膀胱癌细胞中均表达。对照组及实验组膀胱癌细胞加入慢病毒72小时后,在荧光显微镜下观察,发现感染效率达到百分之八十以上,细胞状态良好。RT-PCR结果显示,经慢病毒感染后,实验组膀胱癌T24细胞中靶基因(SAPCD2)mRNA的表达受到明显抑制(p<0.05),干扰效率达79.1%。从Western Blot结果可以看出,靶点对目的基因的表达有破坏性,所以是有效靶点。与对照组相比,shSAPCD2组具有显著的增殖作用,表明SAPCD2的分解代谢对膀胱癌T24细胞增殖有抑制作用。MTT检测结果提示:相比对照组组,实验组组细胞增殖减缓。与对照组相比,shSAPCD2组细胞凋亡增加。[结 论]使用实时定量PCR的方法检测SAPCD2基因在膀胱癌T24细胞中基因表达情况,结果显示敲除后靶基因mRNA表达下降。Western Blot检测目的基因敲减后,SAPCD2蛋白表达量较前降低,表明靶点(SAPCD2基因)对相应蛋白具有直接调控作用,抑制靶基因可以达到抑制靶蛋白表达的目的。膀胱癌细胞T-24被敲减SAPCD2后,与对照组相比,增殖抑制明显,表明SAPCD2对细胞增殖有影响。MTT实验表明敲减SAPCD2后细胞活力下降。慢病毒感染膀胱癌T24细胞5天后,实验组组与对照组相比凋亡率明显上升,表明敲除SAPCD2基因可以诱导膀胱癌细胞T24凋亡上调。
其他文献
[目 的]本实验探讨人胰腺癌PANC-1细胞中切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-completion group 1,ERCC1)表达差异对于PANC-1细胞使用铂类化疗药物敏感性的影响,为指导检测ERCC1基因表达及铂类化疗药物用于胰腺癌个体化治疗提供实验依据。[方 法]本实验首先选用常用人胰腺癌细胞株PANC-1,使用RT-PCR检测该细胞株ERCC1mRNA
[目的]评价腹腔镜下直肠及乙状结肠癌经自然腔道取标本手术的临床疗效,探讨该术式在结直肠癌手术中是否可行以及在临床应用中的优势及不足之处。为经自然腔道取标本手术的进一步推广及发展提供思路。[方法]回顾性收集昆明医科大学附属第一医院肿瘤科2016年6月至2020年11月期间病理确诊为直肠癌及乙状结肠癌并接受根治性手术治疗142例患者的临床资料,根据术前影像学分期排除T4期肿瘤,最终83例患者纳入研究,
[目 的]分析手术切除治疗和选择性动脉栓塞(SAE)治疗肾血管平滑肌脂肪瘤(RAML)的疗效,比较不同类型RAML行不同治疗方式的疗效差异,分析预测影响SAE疗效的因素,为指导RAML治疗选择提供参考。[方 法]收集在2013年1月1日至2020年5月1日期间昆明医科大学第一附属医院RAML行手术切除或SAE治疗的129例住院病例资料。资料主要包括术前一般资料、术前RENAL评分、手术时间、术中失
[目的]绝经前乳腺癌和绝经后乳腺癌是两种不同类型的乳腺癌,具有不同致病原因、预后和影响因素。因此,本研究旨在探讨绝经前后乳腺癌患者在流行病学特征、临床病理特点、治疗方式和预后影响因素等方面的差异,以期更好的指导治疗工作。[方法]对检索时间为2012年1月1日至2019年12月31日于“昆明医科大学第一附属医院”入组的600例绝经前后乳腺癌患者的临床病理资料及随访信息进行回顾性分析研究,使用SPSS
[目的]探讨局部进展期直肠癌全程新辅助治疗的近期疗效。[方法]纳入2017年5月至2020年12月在昆明医科大学第一附属医院胃肠外科同一治疗组已完成治疗的局部进展期直肠癌患者共81例,分为长程放疗TNT组35例,短程放疗TNT组30例,以及拒绝放疗且MRI评估CRM和EMVI阴性的NAC组16例。长程TNT组放疗结束后1周开始予8周期mFOLFOX-6方案化疗,短程放疗TNT组放疗结束后1周开始予
[目 的]探讨细胞角蛋白中的CK7、CK8、CK18、CK19与原发性肝癌切除术后早期复发的相关性,以期对预测复发提供新的思路。[方 法]收集了 2014年12月至2020年12月于昆明医科大学第一附属医院行肝癌切除术的125例患者的资料做回顾性分析研究。随访时间为2年,以1年为界,1年之内复发为早期复发,1年内未复发为晚期复发。收集了每位患者病检报告中免疫组化的结果:CK7、CK8、CK18、C
[目的]错配修复(Mismatch Repair,MMR)蛋白、程序性细胞凋亡因子配体-1(Programmed Death-ligand 1,PD-L1)以及肿瘤免疫浸润细胞(Tumor Infiltrating Leukocytes,TILs)与结直肠癌的预后相关,但其与家族性腺瘤性息肉病(Familial Adenomatous Polyposis,FAP)预后的关系尚不明确,本研究将分析其
[目 的]乳腺癌是全世界女性最常见的恶性肿瘤之一,复发和转移是乳腺癌患者死亡的主要原因。肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境中的核心成分,在恶性肿瘤的发生发展中起着重要的作用。课题组前期结果显示HMOX1在CAF和正常组织成纤维细胞(Normal fibroblasts,NF)中的表达有显著差异。有氧糖酵解增强是肿瘤细胞快速生长和增
[目的]探讨MDA-7/IL-24在甲状腺乳头状癌中存在抑癌作用的临床证据,为今后MDA-7/IL-24在甲状腺乳头状癌中的诊疗应用提供理论依据。[方法]采用MDA-7/IL-24 SiRNA转染人源性甲状腺乳头状癌细胞后敲低 MDA-7/IL-24 的表达,随即使用 Thomsen-Friedenreich 单克隆抗体(A78-G/A7)干预后回复细胞黏附、迁移及侵袭试验进行验证比较。经医院伦理
[目 的]1.探讨蒿甲醚逆转结直肠癌放化疗抗性的作用。2.探讨蒿甲醚逆转结直肠癌放化疗抗性的作用机制。3.探索结直肠癌放化疗抵抗细胞较亲本细胞在体内的生物学行为差别。[方 法]1.将结直肠癌放化疗抵抗细胞HCT116CRR和HT29CRR分4组处理:a.对照组;b.蒿甲醚组;c.放化疗组;d.蒿甲醚联合放化疗组。2.CCK8和克隆形成实验测各组的细胞活性和克隆形成能力。3.流式检测各组的细胞凋亡和