【摘 要】
：
目的:本实验通过大兔腹股沟处脂肪提取兔脂肪干细胞（Rabbit adipose stem cells,RADSCs）,并进行体外培养,培养至数代后,检测其增殖、向成骨分化的能力,证明其具有脂肪干细胞的特性。在前期提取细胞实验的基础上,通过分离、培养兔脂肪干细胞,制备止痛健骨方含药血清,并将其分为对照组、实验组诱导其向成骨分化,观察止痛健骨方对骨形成蛋白-7（Bone morphogenetic p
【基金项目】
：
湖南省中医药管理局重点课题（201908）；
论文部分内容阅读
目的:本实验通过大兔腹股沟处脂肪提取兔脂肪干细胞（Rabbit adipose stem cells,RADSCs）,并进行体外培养,培养至数代后,检测其增殖、向成骨分化的能力,证明其具有脂肪干细胞的特性。在前期提取细胞实验的基础上,通过分离、培养兔脂肪干细胞,制备止痛健骨方含药血清,并将其分为对照组、实验组诱导其向成骨分化,观察止痛健骨方对骨形成蛋白-7（Bone morphogenetic protein,BMP-7）、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）以及对脂肪干细胞增殖能力的影响,为止痛健骨方治疗股骨头坏死提供科学的实验依据,具有重要的应用前景和科学价值。方法:切取适量兔腹股沟处的脂肪组织,用PBS反复冲洗并去除多余组织后,用I型胶原酶消化,分离、重悬待细胞贴壁后培养至第2代,随后加入CD44、CD90抗体,用流式细胞术检测其相应的表面抗原表达;使用成骨、成脂诱导液诱导细胞分化,并用茜素红染色、油红O染色检测,判定细胞为RADSCs。用止痛健骨方对大兔连续7天灌胃,最后一天灌胃后麻醉,随即腹主动脉取血,制备含药血清,制成0%、5%、10%、15%和20%五个浓度的含药血清,设置同样浓度的空白血清。细胞分为对照组、空白血清组、含药血清组,加入相应血清后,用CCK-8法检测细胞增殖的情况。三组各加入成骨诱导液后,用ELISA法检测ALP、BMP-7的表达浓度,绘制图形,解读不同浓度血清、含药血清对细胞向成骨分化的影响,并确认最佳诱导浓度。结果:用I型胶原酶消化、分离、接种细胞后,分离至第2代,随后加入CD44、CD90抗体,用流式细胞术检测到细胞表面抗原CD44、CD90表达呈阳性;用成骨、成脂诱导液诱导细胞分化后,行茜素红染色、油红O染色,结果为阳性,表明细胞为RADSCs。用不同浓度的血清、含药血清培养细胞后,CCK-8法检测ADSCs增值率,观测到各组培养至24小时时,各组差异无明显差异（P＞0.05）,而含药血清10%组细胞在培养48、72小时后相对增值率最高,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）,故含药血清使ADSCs增殖最佳浓度为10%。各组ADSCs细胞培养21天后,与空白对照组比较,止痛健骨方含药血清各组ADSCs细胞BMP-7含量及ALP活力均增加（P＜0.01）;与空白血清-5%组比较,止痛健骨方含药血清各组ADSCs细胞BMP-7含量（P＜0.01）及ALP活力均不同程度增加（P＜0.05）;与含药血清-10%组比较,止痛健骨方含药血清-20%组ADSCs细胞BMP-7含量（P＜0.01）及ALP活力均增加（P＜0.05）,止痛健骨方含药血清-5%组ADSCs细胞BMP-7含量及ALP活力均降低（P＜0.05）。提示止痛健骨方含药血清可明显增加ADSCs细胞BMP-7含量及ALP活力,且含药血清浓度在10%和20%时效果更加显著。结论:本实验成功从兔腹股沟处脂肪中提取、分离、培养出RADSCs,在体外有增殖能力和向成骨、成脂分化的能力。止痛健骨方含药血清在20%浓度时具有明显促进RADSCs向成骨分化的能力,增加BMP-7、ALP的蛋白表达,因此止痛健骨方含药血清可以作为脂肪干细胞向成骨分化的诱导因子,应用于新型骨组织工程有一定的实验基础,为进一步研究止痛健骨方促进脂肪干细胞向成骨分化提供一些思路。
其他文献
目的:运用网络药理学方法探索清金畅肺饮治疗慢性阻塞性肺疾病的作用机制,为临床使用清金畅肺饮治疗慢阻肺提供了科学依据,为发掘清金畅肺饮潜在作用机制提供新方向。方法:运用TCMSP数据库查询11味中药的成分及作用靶点,再通过U n i p r o t数据库将靶蛋白名称转化为对应的基因名,并通过已发表的文献报道及Swiss Target Prediction进行补充,筛选出清金畅肺饮的成分及作用靶点。运
目的:比较HBV感染免疫耐受期、免疫清除期患者与健康对照组外周血单个核细胞（PBMCs）c GAS-STING-TBK1-IRF3信号通路关键分子蛋白表达的差异及补肾解毒法对HBV感染免疫耐受期、免疫清除期患者PBMCs c GAS-STINGTBK1-IRF3信号通路关键分子蛋白及IFN-α、IFN-β表达的影响,进一步阐述补肾解毒法能否恢复HBV感染患者的免疫功能,以期为临床应用补肾解毒法治疗
目的:应用数据挖掘技术,以中医学理论知识为指导,将与治疗高血压病肝阳上亢证相关的公开发表的期刊论文为对象,通过频数分析方法、关联规则算法、熵聚类新方分析等发掘方剂的用药规律,研究治疗高血压病肝阳上亢证的药物配伍规律,为临床用药提供新的思路。方法:（1）收集资料。应用数据库检索2001.1-2021.1,在知网、万方、维普等数据库公开发表的有关于高血压病肝阳上亢证的文献,检索主题词为“高血压”、“肝
目的:收集原发性干燥综合征患者的舌象与唇腺病理指标信息,研究原发性干燥综合征患者舌象与唇腺病理指标的相关性,以期为原发性干燥综合征患者的临床诊治提供依据。方法:根据制定的纳排标准,收集并筛选出湖南中医药大学第一附属医院2019年8月-2021年12月风湿免疫科门诊及住院部的原发性干燥综合征患者的基本信息、唇腺病理指标、舌象。将相关数据导入SPSS23.0软件进行统计,分析舌象与唇腺病理指标的相关性
目的:构建大鼠大脑中动脉缺血再灌注（Middle Cerebral Artery Occlusion Reperfusion,MCAO/R）模型,以活血荣络方水煎液进行体内干预,研究活血荣络方对脑缺血再灌注损伤的保护作用和可能的潜在机制。方法:将72只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（I/R）、活血荣络方低剂量组（HXRLF-L）、活血荣络方中剂量组（HXRLF-M）、活血荣络
目的:本研究通过采集大数据进行回顾性队列研究,观察鳖龙软肝片联合恩替卡韦治疗方案对乙型肝炎肝硬化患者肝癌发生率的影响,评价鳖龙软肝片降低乙型肝炎肝硬化相关肝癌发生率的效果。通过中医药的抗肝纤维化作用,对中医临床证候的改善情况,评价该联合方案的临床效果,发挥中医药的独特优势,为中西医结合治疗乙型肝炎肝硬化提供新的参考依据。方法:本回顾性研究通过在湖南中医药大学第一附属医院信息中心调阅电子病历,筛选出
目的:观察芪仙通络方对MCAO大鼠髓鞘再生及FAM126A表达的影响,探讨其作用机制,为临床应用提供实验室依据。方法:（1）模型的建立、分组、给药:采用改良Longa线栓法制备MCAO大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、芪仙通络方高剂量组、芪仙通络方中剂量组、芪仙通络方低剂量组、丁苯酞组。术后第3天开始干预给药,同时开始腹腔注射Ed U标记脑内增殖细胞,取材前3天开始每日1次,连续给药3天。（2）
总结著名骨伤专家刘寿山辨治筋伤病经验及特色。刘寿山指出筋伤病有着治疗难度大的特点，临证应做到及早诊疗、辨治正确、注重恢复，并围绕中医上筋的生理特点确立了手法、方药、固定与练功的治筋四原则，其六大核心学术思想有推拿手法应发力准确，宜柔透缓而非盲目大力；纠正筋错误的解剖位置有利于恢复其生理功能；治疗时注重整体，分期辨证内服药调理气血；治筋伤宜温远凉；新鲜严重伤筋宜用纸捆绑固定；注重练功对筋伤病的恢复。
目的:从肌张力、肢体肌力以及日常生活能力三个方面,分析平衡舒筋手法治疗脑出血后痉挛性瘫痪的疗效,以便其更好地运用于临床。方法:通过前瞻性队列研究观察2020年12月至2022年2月来自湖南省中医药研究院附属医院、三真康复医院、红枫康复医院的脑出血后痉挛性瘫痪的住院患者共100例。根据患者治疗意愿分为治疗组（基础治疗+平衡舒筋手法）与对照组（基础治疗+Bobath技术）,共观察2周。两组统一采用改良
目的:本研究通过探讨三参首乌汤对人脐静脉内皮细胞（HUVEC细胞）的增殖及细胞凋亡的影响,为三参首乌汤治疗冠心病提供理论基础。方法:1.体外培养HUVEC细胞,当细胞状态良好并处于指数生长期时,将细胞以5×10~4/m L的密度种植到96孔板中,将其分为对照组、不同浓度梯度的三参首乌汤干预组,药物作用细胞24 h后,采用CCK8法检测不同浓度梯度的三参首乌汤对HUVEC细胞活力的影响;根据CCK8