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近年来,电离辐射(ionizing radiation,IR)广泛应用于医学诊断和疾病治疗,人类暴露于IR的机会也越来越多,全身或局部IR导致不同程度放射损伤乃至放射病。不同脏器的放射敏感性不同,如小肠属于放射高度敏感组织、肺属于中度敏感组织、脑属于低度敏感组织。因此本课题针对小肠、肺和脑三个放射敏感性不同组织,选择小肠上皮细胞、肺泡上皮细胞、巨噬细胞和小胶质细胞为研究靶细胞,其中肺泡上皮细胞、小肠上皮细胞分别为肺和小肠放射损伤主要靶细胞,小胶质细胞是脑内重要的免疫细胞,巨噬细胞为全身性的免疫细胞。探讨RH005对放射性肺泡上皮细胞和小肠上皮细胞损伤的保护作用,以及其对照射后小胶质细胞和巨噬细胞生物学行为调控作用。RH005是一种多功能多肽,在许多生理和病理活动中起重要作用,如促进血管生成、促进增殖、抑制凋亡、抗炎等,还能够修复受损心肌、促进毛囊再生、促进皮肤创伤愈合及角膜修复、抑制纤维化等。前期研究发现RH005对于小鼠全身性急性放射损伤具有治疗作用,明显减轻小肠、肺和脑放射损伤,但尚缺乏其对照射后三种组织中放射敏感靶细胞和关键效应细胞影响的研究。本课题主要从以下两方面展开研究:(1)RH005对肺泡上皮细胞和小肠上皮细胞放射损伤的保护作用研究:以肺上皮细胞(RLE-6TN)和小肠上皮细胞(IEC-6)为研究对象,采用8 Gy 60Co源γ射线照射,照后即刻加入10 ng/ml、100 ng/ml、1000 ng/ml的RH005。照射后分别于6 h、12 h、24 h、48 h用CCK-8法检测细胞增殖,照射后1 h用免疫荧光法检测细胞中γH2AX的表达,照射后6 h用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡等指标评价RH005的作用。(2)RH005对照射后小胶质细胞和巨噬细胞生物学行为的调控作用研究:以小胶质细胞(BV-2)和巨噬细胞(RAW264.7)为研究对象,采用8 Gy 60Co源γ射线照射,照后即刻加入10 ng/ml、100 ng/ml、1000 ng/ml的RH005。照射后分别于6 h、12 h、24 h、48 h用CCK-8法检测细胞增殖,照射后6 h用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,照射后24 h用免疫荧光法和免疫印迹法检测BV-2细胞活化(Iba-1的表达),放射免疫法检测细胞中炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13和IFN-γ)的表达等指标评价RH005对照射后上述细胞生物学行为的影响。通过以上实验得出结果如下:(1)RH005对放射性肺泡上皮细胞和小肠上皮细胞损伤具有保护作用:RH005促进照射后上皮细胞增殖,RLE-6TN细胞照射后48 h,与R组相比,各剂量RH005组增殖均明显升高;IEC-6细胞照射后24 h,与R组相比,M组增殖活力明显升高,照射后48 h,M和H组增殖活力均明显升高。RH005减轻照射后上皮细胞DNA损伤,RLE-6TN细胞和IEC-6细胞照射后1 h,与R组相比,各剂量RH005组细胞的DNA损伤均明显减轻。RH005抑制照射后上皮细胞凋亡,RLE-6TN细胞照射后6 h,与R组相比,M组晚期凋亡细胞数及各剂量RH005组总凋亡细胞数明显减少;IEC-6细胞照射后6h,与R组相比,各剂量RH005组早期凋亡细胞数及M组晚期凋亡细胞数均显著减少。(2)RH005对照射后小胶质细胞和巨噬细胞生物学行为具有调控作用:RH005抑制放射所致小胶质细胞活化,BV-2细胞照射后24 h,R组BV-2细胞中Iba-1表达增加,RH005处理后,各剂量RH005组细胞中Iba-1表达均降低。RH005抑制放射所致小胶质细胞和巨噬细胞中炎性细胞因子表达,照射后24 h,BV-2细胞中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13和IFN-γ表达增加,RH005处理后,L组的IL-4,M组的TNF-α、L-1β和IL-4表达降低。照射后24 h,RAW264.7细胞中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6和IL-13表达均增加,RH005处理后,各剂量RH005组细胞TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13和IFN-γ表达均降低,但无显著性差异。但RH005对照射后小胶质细胞和巨噬细胞的增殖和凋亡未见明显影响。根据以上结果,得出结论如下:(1)RH005对肺泡上皮细胞和小肠上皮细胞放射性损伤具有保护作用,主要通过减轻细胞DNA损伤,进而抑制细胞凋亡,并促进照射后细胞增殖。(2)RH005对照射后小胶质细胞和巨噬细胞生物学行为具有调控作用,可抑制小胶质细胞激活,减少小胶质细胞和巨噬细胞中炎性细胞因子的表达。