【摘 要】
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过敏性鼻炎（Allergic rhinitis,AR）是与多种免疫细胞和炎症因子相互作用而形成的慢性炎症性疾病,临床症状表现为鼻痒、打喷嚏、流鼻涕、嗅觉障碍、鼻塞等,病因较多,其中豚草花粉已成为东北地区乃至全国夏秋季节引发过敏性鼻炎的主要过敏原。为了预防和治疗豚草花粉诱导的过敏性鼻炎,本文通过建立豚草花粉致小鼠过敏性鼻炎模型和细胞模型,研究中药白芝,即香栓菌的抗过敏性鼻炎的作用,为预防和治疗过敏性
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过敏性鼻炎（Allergic rhinitis,AR）是与多种免疫细胞和炎症因子相互作用而形成的慢性炎症性疾病,临床症状表现为鼻痒、打喷嚏、流鼻涕、嗅觉障碍、鼻塞等,病因较多,其中豚草花粉已成为东北地区乃至全国夏秋季节引发过敏性鼻炎的主要过敏原。为了预防和治疗豚草花粉诱导的过敏性鼻炎,本文通过建立豚草花粉致小鼠过敏性鼻炎模型和细胞模型,研究中药白芝,即香栓菌的抗过敏性鼻炎的作用,为预防和治疗过敏性鼻炎提供新药源,也为香栓菌的进一步开发和利用提供理论依据。（1）采用豚草花粉混悬液进行腹腔注射和滴鼻局部刺激构建小鼠过敏性鼻炎模型,用不同浓度的香栓菌多糖（400mg/kg,100mg/kg）、香栓菌水提物（240mg/kg,60mg/kg）、香栓菌石油醚提取物（24mg/kg,6mg/kg）以及氯雷他定（LT,2mg/kg）对小鼠进行灌胃给药。通过记录小鼠挠鼻和打喷嚏的次数,评价小鼠过敏性鼻炎症状;HE染色观察;ELISA检测小鼠血清和鼻腔灌洗液中炎症因子水平;Western blot法检测小鼠鼻黏膜组织中与NLRP3炎症小体相关蛋白表达情况。结果表明:香栓菌各提取物高剂量能明显改善小鼠过敏性鼻炎症状;香栓菌各提取物高剂量组小鼠血清中IL-18、IL-1β和Ig E水平及小鼠鼻腔灌洗液中IL-18、IL-1β和IL-6水平显著降低（P＜0.05）;显微镜下观察到香栓菌石油醚提取物能明显改善小鼠鼻黏膜组织病理形态和减少嗜酸性粒细胞浸润情况;香栓菌石油醚提取物能显著下调小鼠鼻黏膜组织中NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白表达（P＜0.05）。（2）采用硅胶柱层析法对香栓菌石油醚提取物中的化学成分进行分离,得到Fr.3组分（PET）;采用薄层层析和GC-MS法进行分析。分析结果显示:共检测出10种化合物,含有脂肪酸类化合物、甾类化合物、萜类化合物,其中含量较多的是甾类化合物,占总含量的56.81%。（3）体外细胞实验探究了从香栓菌石油醚提取物中分离得到的组分（PET）对豚草花粉提取物（RWE）和脂多糖（LPS）共同诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症反应的抑制作用及相关分子机制。采用CCK-8和FDA法测定PET及RWE和LPS对细胞活力的影响;DAFH-DA法测定RAW264.7巨噬细胞中ROS的产生;ELISA法检测细胞上清液中促炎因子水平;Western blot和RT-PCR检测细胞中相关蛋白和基因表达;免疫荧光检测细胞中NLRP3蛋白表达。结果表明:PET可显著促进RAW264.7巨噬细胞活力（P＜0.05）;PET显著减少RWE和LPS活化的RAW264.7细胞中IL-6、TNF-α、IL-18、IL-1β、NO、PGE2的释放（P＜0.01）,PET可显著抑制细胞中i NOS、COX-2、P-P65、P-IκBα、NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达（P＜0.01）,IL-6、TNF-α、IL-18、IL-1β基因表达显著下调（P＜0.01）。综上,香栓菌石油醚提取物可改善豚草花粉诱导的小鼠过敏性鼻炎症状,其机制是通过抑制NLRP3炎症小体活化,从而抑制Caspase-1的活化,进而减少IL-18和IL-1β的释放;PET可减轻RWE和LPS引发的RAW264.7巨噬细胞炎症反应,其机制是通过抑制ROS引发的氧化应激反应,调控NF-κB信号通路,进而抑制NLRP3炎症小体活化,从而抑制相关炎症因子的释放,最终起到减轻炎症反应的作用。
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