研究背景高脂饮食诱导的脂肪肝是一种伴有免疫功能障碍和代谢紊乱的慢性疾病,其涉及多种生物学途径。根据我们前期研究表明,高脂饮食诱导的肥胖相关脂肪肝小鼠脓毒症死亡率更高,肝损伤更严重,但免疫反应减弱。同时体外细胞实验也得出相似结论,棕榈酸（PA）处理肝原代细胞（模拟体外肝细胞脂肪积聚）的上清液可显著降低脂多糖（LPS）刺激后巨噬细胞的炎性细胞因子表达,表现为免疫抑制状态。但其中的作用机制尚未明确,我们推测其可能与肝细胞的代谢紊乱相关。研究目的通过代谢组学分析明确高脂饮食和正常饮食小鼠之间以及棕榈酸和牛血清白蛋白处理的肝原代细胞相关上清液之间的代谢产物的差异,并通过相关体外细胞实验探究差异代谢产物对免疫调节的作用。研究方法1.构建肥胖相关脂肪肝动物模型我们将四周大的雄性C57BL/6小鼠随机分为两组,一组喂食正常的食物（Normal chow,NC）作为对照,另一组喂食高脂肪食物（High-fat diet,HFD）。饲养15周后,根据小鼠体重变化、肝脏甘油三酯含量及肝脏病理切片确定模型构建成功后取小鼠血清行代谢组学分析。2.构建细胞模型分离培养肝原代细胞,用棕榈酸（Palmitic acid,PA）或牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）为对照剂孵育12小时模拟体外肝脂肪积聚,然后用新鲜的RPMI1640培养基替换上清液,再培养12小时。最后收集相关上清液行代谢组学分析。3.明确差异代谢产物β-羟基丁酸（BHB）的免疫调节作用根据代谢组学分析结果推测β-羟基丁酸（BHB）可能是其中的关键代谢产物,用不同浓度（1mM、10mM、20mM）的β-羟基丁酸（BHB）处理脂多糖（LPS）刺激的Raw264.7细胞24小时后,提取细胞RNA进行肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-10（IL-10）的基因转录水平检测。研究结果代谢组学分析表明,与相应的对照组相比,高脂饮食（HFD）组和棕榈酸（PA）组中,许多可能在免疫反应中发挥作用的关键代谢物的水平发生了改变,如β-羟基丁酸、酮亮氨酸、扁桃酸和苯丙酮酸等。具体来说,β-羟基丁酸（β-hydroxybutyric acid,BHB）对脂多糖（LPS）刺激的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（Raw264.7）具有免疫抑制作用。研究结论摄入高脂食物可能会改变肝脏代谢谱,并且某些代谢产物（如β-羟基丁酸）可能会在机体脓毒症时将免疫系统从免疫平衡状态转变为免疫抑制的状态。