为通过原核表达实现大量产出细菌素并检测其理化特性及抑菌机理,本试验通过聚合酶链式反应对乳酸片球菌R-4的pedA基因进行扩增回收,与pMD19-T载体连接后转入E.coli DH5感受态细胞。提取克隆后的pedA基因与表达载体pET-32a（+）连接,形成重组质粒pET-32a-pedA并转入E.coli BL21（DE3）感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导,乳酸片球菌R-4细菌素PA-1在大肠杆菌胞内表达的蛋白大小为26 kDa,符合预期。表达蛋白经Ni-NTA柱纯化后,Western blot方法鉴定为含有His-tag的乳酸片球菌R-4细菌素PA-1,以金黄色葡萄球菌为指示菌,经检测其抑菌作用与蛋白活性良好。乳酸片球菌R-4细菌素PA-1在Amp质量浓度80μg/mL、OD600为0.6时诱导、诱导温度37℃、IPTG质量浓度0.8 mM、诱导培养8 h时所表达的蛋白浓度最高,为 0.245 mg/mL。以金黄色葡萄球菌为指示菌检测其理化特性,发现纯化后的乳酸片球菌R-4细菌素PA-1在40～121℃作用20 min,pH 2～12环境中,紫外线照射0～10 h,过氧化氢酶作用 2 h后其抑菌范围分别为 14.7～15.6 mm、14.0～16.5 mm、15.1～15.8 mm和 14.9 mm,而分别经胃蛋白酶和胰蛋白酶作用2 h后均失去抑菌作用。这表明乳酸片球菌R-4细菌素PA-1对高温、强酸、紫外线和过氧化氢酶均具有较好的稳定性,对强碱有弱敏感性,而胃蛋白酶和胰蛋白酶使其失活。乳酸片球菌R-4细菌素PA-1对金黄色葡萄球菌最小抑菌质量浓度为0.025 mg/mL;对金黄色葡萄球菌的生长有一定的抑制作用;随着乳酸片球菌R-4细菌素PA-1质量浓度的提高金黄色葡萄球菌细胞形态会逐渐丧失,细胞壁和细胞膜的通透性逐渐增强、DNA逐渐分解为小于250 bp的片段;不同浓度的乳酸片球菌R-4细菌素PA-1对金黄色葡萄球菌DNA的释放量影响不同,1 ×MIC和2×MIC浓度下DNA的释放量随作用时间增长,3 ×MIC浓度下DNA的释放量1h内达到最大,之后略有下降。随着乳酸片球菌R-4细菌素PA-1浓度提高,对金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制从43.68%提高到71.70%。表明乳酸片球菌R-4细菌素PA-1对金黄色葡萄球菌是通过破坏其细胞膜、DNA及抑制生物膜形成,从而菌体出现形态改变、破损、部分菌体有皱缩、出现干瘪导致死亡。