【摘 要】
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目的:采用前期合成的明胶表面改性的碳纳米管（CNTs/Gel）作为药物运输系统负载顺铂,构建p H响应性碳纳米管改性纳米药物运输系统,对其理化性质进行表征,对其药物装载率和包封率、释放和体外抗肿瘤作用进行初步研究,为改性后的CNTs作为一种新兴的药物运输系统的临床应用提供基础参考。方法:1.按照前期实验的标准制备CNTs/Gel悬浮液,在CNTs/Gel悬浮液加入顺铂,在室温条件下搅拌12 h（4
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目的:采用前期合成的明胶表面改性的碳纳米管（CNTs/Gel）作为药物运输系统负载顺铂,构建p H响应性碳纳米管改性纳米药物运输系统,对其理化性质进行表征,对其药物装载率和包封率、释放和体外抗肿瘤作用进行初步研究,为改性后的CNTs作为一种新兴的药物运输系统的临床应用提供基础参考。方法:1.按照前期实验的标准制备CNTs/Gel悬浮液,在CNTs/Gel悬浮液加入顺铂,在室温条件下搅拌12 h（450 rpm）,收集样品并离心,去除上清液后冷冻干燥24 h,获得负载顺铂的明胶改性的碳纳米管（CNTs/Gel/CSP）,对其进行理化性质的表征。2.采用紫外分光光度计对药物装载率和包封率进行分析。制备不同质量比（MCSP:MCNTs/Gel=1:2,1:1,2:1）的CNTs/Gel/CSP悬浮液,检测离心后样品上清液的紫外吸光度（λ=204 nm）,结合标准曲线（CSP-H2O）计算CNTs/Gel/CSP的装载率和包封率。3.采用紫外分光光度计对药物累计释放量进行评估。根据前期药物装载率的结果选用装载率最高的一组（MCSP:MCNTs/Gel=1:1）进行释药研究,制备6组负载顺铂的CNTs/Gel悬浮液,收集样品离心,随机分为2组（n=3）,分别加入3ml磷酸盐缓冲液（PBS,p H=6.0）和3 ml PBS溶液（p H=7.4）,填充到透析袋中并密封两端,放入50 ml的PBS溶液中;在不同时间点收集3 ml样品并加入同体积PBS溶液。检测不同时间点收集样品的紫外吸光度（λ=204 nm）,结合标准曲线估算CNTs/Gel/CSP的累计释放量。4.采用CCK-8方法和AO/EB染色方法评价CNTs/Gel/CSP和CSP的体外抗肿瘤作用。分别用浓度为1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的CSP和CNTs/Gel/CSP样品处理人舌鳞癌细胞Cal-27,设置5个重复组,加入CCK-8试剂,用酶标仪在405 nm波长处测定其光吸收值观察细胞活力;加入AO/EB试剂,用荧光显微镜观察细胞形态。5.统计分析:两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）进行统计学分析,采用LSD法进行两两比较,部分数据采用线性分析,P＜0.05表示差异具有统计学意义。结果:1.采用扫描电子显微镜（SEM）、傅立叶红外光谱（FT-IR）、紫外-可见分光光度（UV-vis）、Zeta电位和动态光散射（DLS）的结果表明CNTs/Gel/CSP药物运载系统合成成功。2.采用紫外分光光谱分析结合标准曲线,分析不同质量比（MCSP:MCNTs/Gel=1:2,1:1,2:1）的装载率和包封率。计算得出:当MCSP:MCNTs/Gel=1:1时,CSP的装载率为10.83±4.14%（P＜0.05）、CSP的包封率为21.67±8.27%（P＜0.05）,是三组中最高。3.应用膜透析法测定药物的体外释放行为,结果表明p H由7.4降低到6.0,顺铂药物释放时间明显增加,以1%/day速率累计释放达14天,药物释放达56%。4.采用不同浓度的CNTs/Gel/CSP和CSP对人舌鳞癌细胞Cal-27进行处理。采用CCK-8方法和AO/EB染色对两种药物的抗肿瘤作用进行分析。体外实验证明CNTs/Gel/CSP具有明显的抗肿瘤作用。在相同浓度和相同暴露时间下,合成的CNTs/Gel/CSP和CSP具有相似的抗肿瘤作用,具有剂量依赖性,随着浓度的增加,抗肿瘤作用越强（P＜0.05）;在高浓度下（10μg/ml、20μg/ml）两者均表现较强的体外抗肿瘤作用。结论:采用明胶表面改性后的CNTs/Gel作为药物运载系统可以负载CSP,在肿瘤微酸性环境中稳定并持续地释放;在保证足够药物装载率（MCSP:MCNTs/Gel=1:1）的前提下,增加了CSP的体外抗肿瘤作用。CNTs/Gel/CSP作为一种药物运输系统既具有良好的抗肿瘤作用又具有缓释CSP的良好效果,为进一步推动纳米药物运输系统在癌症的应用奠定了一定的基础,为改性后的CNTs作为一种新兴的药物运输系统的临床应用方面提供基础参考。
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