仙灵骨葆胶囊是临床广泛应用的成熟中药成方制剂,有着较好的临床疗效,但是近年来却屡次发生因服用该药而导致肝损伤的不良反应事件[1-5],因此阐明仙灵骨葆胶囊的肝损伤作用机制,明确仙灵骨葆的毒性物质基础,对于保障该药物的合理使用具有重要价值。本研究优化了基于CCK-8法检测的体外细胞毒性筛选模型,有效地分析了包括全方和各缺方中药提取物的毒性,结果IC50值分别为:（全方）173.7μg/ml、缺淫羊藿提取物300.2μg/ml、缺续断提取物253.0μg/ml、缺丹参提取物283.2μg/ml、缺知母提取物222.5μg/ml、缺补骨脂提取物294.4μg/ml、缺地黄提取物299.8μg/ml。对各单方中药提取物也进行了体外毒性研究,结果IC50值分别为:淫羊藿提取物124.9μg/ml、续断提取物209.2μg/ml、丹参提取物405.3μg/ml、知母提取物未筛出该提取物的IC50、补骨脂提取物84.43μg/ml、地黄提取225.8μg/ml。全方和缺方的IC50值数据差异较小,单方提取物中淫羊藿和补骨脂的IC50值明显低于其他提取物,故初步推断仙灵骨葆处方中具有肝毒性的中药是淫羊藿和补骨脂。线粒体损伤是药物肝毒性作用的重要靶标,课题组前期研究发现仙灵骨葆具有显著的线粒体抑制活性。因此,本课题在上述研究的基础上,通过Seahorse XF96细胞线粒体压力测试试剂盒对仙灵骨葆进行了细胞线粒体损伤研究,结果显示全方提取物和补骨脂提取物给药组ECAR值明显高于基础值,由于糖酵解途径会在线粒体功能受损组别表现出明显的代偿,由此说明全方提取物和补骨脂中药具有明显线粒体损伤毒性。为明确仙灵骨葆中毒性中药的具体毒性成分,对淫羊藿和补骨脂进行了化学成分分析。对淫羊藿和补骨脂进行有效部位提取,并对得到的不同提取部位进行体外细胞毒性筛选,确定淫羊藿和补骨脂乙酸乙酯层为毒性有效部位,理论药物浓度下的存活率分别为:18.43%和11.47%。针对淫羊藿和补骨脂毒性有效部位,首先采用HPLC-TOF/MS法进行化学成分的初步分析,分别得到淫羊藿和补骨脂的乙酸乙酯层的正负离子的等离子流图,对其进行解析,明确了淫羊藿中11个和补骨脂中9个化学成分。对得到的20种化学成分中选取8个对照物进行了的HPLC-DAD定量分析,为后续体内毒性成分定量研究做基础,为明确毒性机制做准备。