目的酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗慢性髓性白血病(CML)已经成为经典的疾病治疗模式,但需要终生服药始终是TKI的弊端,停药研究的进行为CML提出了新的治疗目标。近年来,骨髓免疫组分在停药后的作用逐渐被大部分研究者所认可,髓源抑制细胞(MDSC)为一群异质性细胞群体,发挥免疫抑制功能,提供适合肿瘤细胞生存的免疫抑制性微环境。我们前期研究发现停药后复发患者MDSC数目偏高,最新的研究提示肿瘤分泌的囊泡具有高效诱导MDSC的能力。本研究通过体内外实验探讨不同处理的K562细胞产生的微泡(MV)对MDSC的扩增作用,寻求患者停药后存在差异结局的重要原因,为后期的停药实验研究奠定重要基础。方法本研究中,利用CCK8法检测伊马替尼、达沙替尼的IC50值,设置低于IC50的药物浓度对K562细胞进行不同加药时间及停药时间的处理,流式细胞术分析凋亡比例,选择合适的药物处理时间;采用密度梯度离心法收集不同处理的K562细胞来源的MV;Ficoll密度梯度法分离外周血来源单个核细胞(PBMC);将不同处理的K562细胞来源的MV加入PBMC中诱导MDSC的变化,流式测MDSC的比例。体外实验:将Balb/c小鼠分为9组,尾静脉注射不同处理的K562细胞来源的MV,仅注射一次,在注射的0、3、5天小鼠内眦静脉采血100ul~200ul,流式检测MDSC比例,在第5天处死小鼠,比较每组脾脏大小,取骨髓和脾脏细胞,流式测MDSC比例。结果1、与空白组相比,K562细胞来源的MV促进MDSC及其亚型G-MDSC和M-MDSC的增加(P<0.05);2、无论是伊马替尼组还是达沙替尼组,K562细胞加药处理后产生的MV引起MDSC及其亚型G-MDSC和M-MDSC的变化与未加药组相比无统计学意义;3、K562细胞经伊马替尼或达沙替尼加药、停药处理后,停药后产生的MV引起MDSC及其亚型G-MDSC和M-MDSC的比例高于停药前(P<0.05);4、动物实验证明K562细胞来源的MV促进MDSC的增加;与未加药组相比,加药后产生的MV引起MDSC的比例明显降低(P<0.05);与停药前相比,停药后产生的MV引起MDSC的比例明显增加。结论体内外实验证明不同处理的K562细胞来源的MV具有诱导MDSC扩增的作用,提示我们导致CML患者停药后存在差异结局的重要原因可能是白血病干细胞产生的MV对MDSC的扩增作用不同,MV可能成为重要的停药检测指标及干预靶点。