葡萄座腔菌科(Botryosphaeriaceae)真菌的系统分类研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:lhnyzz520
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树木溃疡类病害包括溃疡、烂皮、腐烂、干腐、轮纹、疮痂、流胶、癌肿、枝枯、枯梢等多种类型,能够在杨树、苹果、梨树、石榴以及松树等多种生态、经济林木上造成严重危害。我国树木溃疡病通常由真菌性病原引起,葡萄座腔菌属BotryosphaeriaCas.被认为是最重要的树木溃疡病病原真菌类群。葡萄座腔菌属真菌的分类鉴定依据其有性型及无性型特征,主要是无性型特征,然而由于对应于葡萄座腔菌的无性型类型众多,并且这些无性型的确定存在很多混乱之处,葡萄座腔菌属(Botryosphaeria)真菌分类也一直是真菌分类的热点之一。近年来的真菌系统学研究发现,传统意义上的葡萄座腔菌是由多个单系类群构成的复合类群,这些单系类群对应于葡萄座腔菌科的不同属。本研究主要对河北省树木溃疡病害进行系统调查,病原分离培养,并对葡萄座腔菌及其相关病原真菌进行鉴定及系统分类研究,以期了解河北省树木溃疡病害的分布特征以及新的分类系统下树木溃疡类病害与病原之间的对应关系。同时,陕西、山东、重庆等三个不同地区的Botryosphaeria dothidea菌株进行了遗传多样性研究。本研究以河北省8个市、10个县的寄主植物上分离得到的116株葡萄座腔菌科真菌为材料,根据培养学特征、形态学特征、系统发育分析对试验菌株进行分类鉴定;应用RAPD、ISSR分子标记研究了来自山东、陕西和重庆等三个省份的不同寄主植物上的病原真菌Botryosphaeria dothidea之间的相互关系及遗传分化;应用M13分子标记技术结合系统发育学分析,对来自河北、山东、陕西、四川、重庆等中国的5个省份的43份试验菌株进行研究。本研究的主要结果如下:1.通过对河北省树木溃疡病病害病原研究,确定葡萄座腔菌属及相关真菌在中国的新寄主类型共12个属、12个种植物,包括大叶黄杨(Euonymus japonicus Thunb.)构树(Broussonetia papyrifera(L.)Vent)、侧柏(Platycladus orientalis (Linn.)Franco)、金银木(Lonicera maackii(Rupr.)Maxim.)、连翘(Forsythia suspensa (Thunb.) vahl.)、紫荆(Cercis chinensis Bunge.)、二乔玉兰(Magnolia soulangeana Soul.)、阿月浑子(Pistacia vera L.)、火炬树(Rhus typhina Nutt.)、花椒(Zanthoxylum bungeanumMaxim.)、美人梅(Prunus blireana cv. Meiren)、刺梅(Euphorbia milii var.splendens(Bojer ex Hook)Ursch)。2.利用培养学、形态学、分子系统学特征将河北省的116份树木溃疡病病原真菌菌株鉴定为B.dothidea、“B”.sarmentorum、“B”.stevensii、“B”.obtusa、Guignardiacitricarpa等5种葡萄座腔菌科真菌。3.在诱导树木溃疡病菌产生孢子过程中,发现WA培养基上以华山松松针和西黄松松针为材料均可以诱导Botryosphaeriaceae真菌产生孢子。但相同培养条件下西黄松比华山松更容易诱导产孢。4.应用形态鉴定、rDNA-ITS和EF-1α序列分析,首次确定我国桤木溃疡病的病原真菌是B. dothidea。5.RAPD/ISSR聚类分析结果显示:基于Euclid或Dist距离系数构建的NJ聚类树显示,来自山东、陕西和重庆等三个省份的42个试验菌株可以划分为4个RAPD/ISSR类群,其中类群Ⅳ是最大的类群,包括19个菌株,占所有42个菌株的45%;UPGMA聚类分析表明,42个B.dothidea菌株的遗传相似系数是0.82-0.99,在0.84处被划分为3个RAPD/ISSR类群;由于UPGMA聚类树划分类群太少,而且内部分支不明显,因此Euclid或者Dist距离系数法构建的NJ聚类树是最优聚类树; B. dothidea存在种内遗传分化,种内遗传分化与寄主、地域来源有一定的相关性。6.利用M13引物扩增不同的树木溃疡病菌种类可以产生稳定、多态性的带型;不同种类的树木溃疡相关真菌对应不同的M13带型。因此M13分子标记可以可快速简便地区分不同种类的树木溃疡病病原真菌。
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