淀粉的支链影响了淀粉的降解,淀粉脱支酶可以切掉淀粉的支链,提高淀粉的利用效率。常见的淀粉脱支酶有普鲁兰酶和异淀粉酶。本实验利用大肠杆菌对Thermosipho africanus(非洲热栖菌)来源的普鲁兰酶和sulfolobus tokodaii(头寇岱硫化叶菌)来源的异淀粉酶进行异源表达,性质及其初步应用研究。thermosiphp africanus来源的普鲁兰酶为I型,只能水解α-1,6糖苷键,理论分子量为96.4kDa,最适pH6.8,最适温度为70℃,经过his-tag和70℃30min热处理后得到的比酶活为96μmol/(mg*min),70℃下半衰期为6 h,该酶底物特异性较高,难以与普鲁兰糖以外的底物反应。sulfolobus tokodaii来源的异淀粉酶KEGG数据库标注为糖原切支酶,但是其糖原切支酶活仅为支链淀粉的3.1%,故认定其为异淀粉酶,理论分子量为82.9kDa,最适pH5.5,最适温度为85℃,比酶活为6.4μmol/(mg*min),在pH 5.5,90℃下半衰期为3.5 h。该酶底物特异性较低,在长链麦芽糊精上有90%以上的相对酶活,在普鲁兰糖上也有20%以上的相对酶活。异淀粉酶直接用于淀粉的高温预处理可以得到平均长度在20以下的直链糊精(DE>5)。