【摘 要】
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目的:通过体外实验探究连朴饮对幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori,Hp）的抑制作用,以及对Hp胶原蛋白酶（Hp Prt C）、血型抗原结合黏附因子（Bab A）、前炎症外膜蛋白（Oip A）、上皮接触毒性蛋白（Ice A）m RNA表达水平的影响,探讨连朴饮在Hp治疗中的作用机制。方法:1.在标准条件下培养Hp和人胃粘膜上皮（GES-1）细胞到适宜浓度和生理条件以备用;2.通过光
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目的:通过体外实验探究连朴饮对幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori,Hp）的抑制作用,以及对Hp胶原蛋白酶（Hp Prt C）、血型抗原结合黏附因子（Bab A）、前炎症外膜蛋白（Oip A）、上皮接触毒性蛋白（Ice A）m RNA表达水平的影响,探讨连朴饮在Hp治疗中的作用机制。方法:1.在标准条件下培养Hp和人胃粘膜上皮（GES-1）细胞到适宜浓度和生理条件以备用;2.通过光密度（Optical Density,OD）值的测定绘制生长曲线,确定Hp的生长对数期;3.本研究分为中药组（CG）和西药组（WG）,并根据实验需求增加空白组（BG）和对照组（CTG）。中药组所用药物为连朴饮,西药组所用药物为四联药物（阿莫西林胶囊、胶体果铋胶囊、克拉霉素分散片、兰索拉唑肠溶片）,通过打孔法获得两种药物的抑菌环直径,进而采用液体倍比稀释法测定连朴饮和四联药物对Hp的最小抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌浓度（Minimum bactericidal concentration,MBC）;4.采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-q PCR）测定并分析连朴饮对Hp Prt C、Bab A、Oip A及Ice A的m RNA表达水平的影响。5.通过Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒测定连朴饮对Hp感染后GES-1细胞存活率的影响;6.通过流式细胞实验（Flow Cytometry,FCM）测定连朴饮对Hp感染后GES-1细胞凋亡水平的影响;结果:1.药物抑制Hp的一般情况Hp在24～30h进入生长对数期;液体稀释法测定连朴饮对Hp的MIC值为14.150 mg/ml,MBC值为14.150 mg/ml,四联药物组对Hp的MIC值为1.238 mg/ml,MBC值为2.475 mg/ml;2.药物对Hp基因表达水平的影响RT-qPCR测定结果显示,与对照组相比,连朴饮使得Hp的Hp Prt C、Bab A、Oip A及Ice A的m RNA表达水平降低,有统计学差异（P＜0.05）;与四联药物相比,连朴饮作用下Hp的Hp Prt C、Bab A、Oip A及Ice A的m RNA表达水平较高,有统计学意义（P＜0.05）。3.药物对Hp感染后GES-1细胞的作用CCK-8实验结果表明,与对照组相比,连朴饮和四联药物单独作用下的Hp感染后GES-1细胞的存活率都显著升高（P＜0.05）,且组间有差异（P＜0.05）;FCM实验结果表明,与对照组相比,连朴饮和四联药物单独作用下的Hp感染后GES-1细胞的凋亡率都显著降低（P＜0.05）,且组间有差异（P＜0.05）。结论:1.连朴饮在体外能有效抑制Hp的生长,一定浓度下还具有杀灭作用。2.连朴饮通过下调Hp的HpPrtC、BabA、OipA、IceA的mRNA表达水平,减轻Hp自身产生的细胞毒素和毒力因子对人体的毒害作用,可能是其治疗Hp的作用机制。3.连朴饮能够提高Hp感染后GES-1细胞的存活率,降低Hp感染后GES-1细胞的凋亡率。
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