脂肪因子Chemerin在母猪性腺功能中的作用及其机制的研究

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脂肪因子Chemerin在炎症反应、糖脂代谢、心血管功能等方面具有生理作用,并且可能参与动物生殖功能的调节。本研究通过研究Chemerin及其受体在母猪和雌鼠生殖器官中的定位与表达、对猪颗粒细胞激素分泌的影响以及对猪卵母细胞体外成熟和发育能力的影响,探索脂肪因子Chemerin及其受体在猪卵巢功能中的作用及其作用机制,为动物与人类的生殖生理及相关疾病机理的研究提供理论依据。结果如下:1.Chemerin及其受体在母猪和雌鼠的生殖器官中的分布和表达:通过免疫组织化学、免疫荧光和Q-PCR研究发现,在母猪和雌鼠卵巢中的颗粒细胞、卵母细胞、黄体以及子宫内皮细胞上和输卵管上皮细胞,Chemerin及其受体均有相类似的表达,且受体GPR1在卵巢卵泡颗粒细胞、卵丘、黄体以及间质中的表达量极显著高于其他两个受体CMKLR1、CCRL2(P<0.001)。2.Chemerin及其受体对母猪颗粒细胞的激素分泌的影响及机制:通过对猪颗粒细胞进行Chemerin重组蛋白、hCG、GPR1抗体分组处理的体外培养,结果显示,hCG能够促进猪颗粒细胞孕激素和雌激素的分泌,而Chemerin则会抑制其分泌,GPR1抗体阻断Chemerin/GPR1信号通路后,Chemerin对孕酮的抑制作用得到了缓解,同时激素合成酶St AR、17β-HSD和CYP11A1的表达显著升高。这说明Chemerin可能主要通过与受体GPR1结合,抑制StAR、17β-HSD和CYP11A1的表达,从而抑制孕激素和雌激素的合成分泌。3.Chemerin对猪卵母细胞体外成熟及发育能力的影响:将裸卵和卵丘卵母复合体分别在有无Chemerin重组蛋白的培养基中培养,发现裸卵在体外培养过程中成熟率极低,与卵丘卵母复合体的体外成熟率相比,差异极显著(P<0.001)。而在加入Chemerin重组蛋白之后,猪卵母细胞减数分裂进程被抑制,成熟被延缓,其成熟率也随之降低。而成熟的卵母细胞在含有Chemerin重组蛋白的培养液中培养,发现与无Chemerin重组蛋白的对照组卵裂率相比,加入Chemerin重组蛋白后成熟卵母细胞的卵裂率差异显著降低(P<0.001)。另外,我们还发现裸卵培养至成熟后进行孤雌激活的卵母细胞在后期培养中极易发生非整倍体裂变,或者至收样时已经死亡或停滞生长。总之,Chemerin在母猪和雌鼠卵巢中的颗粒细胞、卵母细胞、黄体以及子宫内皮细胞上和输卵管上皮细胞Chemerin及其受体均有相类似的表达,且受体中GPR1表达量最高。Chemerin可能主要通过与受体GPR1结合,抑制StAR和17α-HSD和CYP11A1的表达,从而抑制母猪颗粒细胞分泌合成孕激素和雌激素。同时,Chemerin还对猪卵母细胞的成熟和发育有一定抑制作用。
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