【摘 要】
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目的:探讨RNAi介导miRNA-155基因沉默靶向调节TGF-β1/SMAD2-Cyclin D1信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的生物学行为的影响。方法:根据6株人胃癌细胞的miRNA-155 m RNA表达量确定稳定沉默细胞。RNAi拟构建miRNA-155人胃癌SGC-7901稳转株,测序和鉴定重组慢病毒载体。除未处理组即空白对照组（control）外,将未携带目的基因的空载体组即NC
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81360531）； 广西一流学科建设重点项目（2018XK081）；
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目的:探讨RNAi介导miRNA-155基因沉默靶向调节TGF-β1/SMAD2-Cyclin D1信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的生物学行为的影响。方法:根据6株人胃癌细胞的miRNA-155 m RNA表达量确定稳定沉默细胞。RNAi拟构建miRNA-155人胃癌SGC-7901稳转株,测序和鉴定重组慢病毒载体。除未处理组即空白对照组（control）外,将未携带目的基因的空载体组即NC-sh RNA组（NC-sh RNA）和携带稳定沉默miRNA-155基因的干扰组即实验组（miRNA-155-sh RNA）共转染293T细胞,测定转染细胞后的慢病毒滴度,通过Real-time PCR检验慢病毒沉默载体对miRNA-155基因的干扰效应。基于CCK-8法、流式细胞技术和Transwell实验分别检测高效沉默miRNA-155基因对人胃癌SGC-7901细胞的增殖、周期、凋亡、迁徙和侵袭能力。采用Real-time PCR和Western blot检测miRNA-155-sh RNA载体对人胃癌SGC-7901细胞中TGF-β1、SMAD2和Cyclin D1水平的影响。结果:基因功能鉴定证实成功构建miRNA-155-sh RNA重组质粒。当miRNA-155-sh RNA组的病毒滴度达1×10~8TU/ml时,细胞转染效率最佳,且PCR检测显示miRNA-155-sh RNA组的miRNA-155基因沉默效果显著高于NC-sh RNA组（P＜0.05）。相比空白对照组和NC-sh RNA,miRNA-155-sh RNA组的细胞增殖、周期、迁徙和侵袭能力均明显增强（P＜0.05）,但细胞凋亡能力明显减弱（P＜0.05）。miRNA-155-sh RNA组中TGF-β1、SMAD2和Cyclin D1的m RNA及蛋白表达均高于NC-sh RNA组和空白对照组（P＜0.05）。结论:成功构建稳定沉默miRNA-155人胃癌SGC-7901细胞株,miRNA-155可正调控TGF-β1、SMAD2和Cyclin D1促进胃癌发展,预示其可作为胃癌治疗的潜在靶点。
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