【摘 要】
:
由于黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)和伏马毒素B1(Fumonisin B1,FB1)毒性大,广泛污染玉米,难以防控,因此,快速灵敏的检测方法是防止已经污染的农产品进入食物链的重要手段。近年来,市售的ELISA试剂盒和试纸条产品由于高特异性强和高灵敏度,广泛用于高通量检测。然而ELISA的准确性和稳定性受许多因素影响;试纸条通常基于单抗标记,其信号放大作用有限,易造成假阴性从而
论文部分内容阅读
由于黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)和伏马毒素B1(Fumonisin B1,FB1)毒性大,广泛污染玉米,难以防控,因此,快速灵敏的检测方法是防止已经污染的农产品进入食物链的重要手段。近年来,市售的ELISA试剂盒和试纸条产品由于高特异性强和高灵敏度,广泛用于高通量检测。然而ELISA的准确性和稳定性受许多因素影响;试纸条通常基于单抗标记,其信号放大作用有限,易造成假阴性从而影响检测结果准确性。目前,单抗(monoclonal antibody,m Ab)是成功构建上述方法的关键试剂,其主要通过筛选阳性杂交瘤细胞分泌而得,因而,杂交瘤细胞的筛选过程主要影响到制备的单抗质量,进而影响到所构建的免疫分析方法的性能。因此,针对严重污染玉米的AFB1和FB1,以及目前市售免疫检测产品的局限性,本课题的主要研究成果如下:(1)有限稀释亚克隆次数对AFB1单抗制备的影响:经PEG法进行细胞融合制备杂交瘤细胞,采用ELISA结合不同浓度的标准品筛选阳性株,并采用有限稀释法对其进行10次亚克隆。结果表明,高浓度的AFB1标准品筛选可能有利于富集保留阳性细胞株,随着亚克隆次数的增加,细胞阳性率和单抗抑制率逐渐增加,然而当亚克隆次数超过7次时,阳性细胞株生长繁殖缓慢,检测周期变长,且单抗的抑制率几乎不变甚至降低。此外,对最终得到的杂交瘤细胞株ZFG8分泌的单抗进行评价和可变区基因和氨基酸序列分析,其半抑制浓度(IC50)为1.1539 ng/m L,检测范围(IC20-IC80)为0.2829-4.7073 ng/m L,对其他黄曲霉毒素的最大交叉反应率为0.73%。(2)构建ELISA以高通量检测玉米粉中的AFB1:为提高ELISA的准确性和稳定性,收集市售和实验室抗原抗体,研究了来自不同厂家的抗原抗体组合对ELISA的效价和灵敏度的影响。在最优的工作条件下,建立了ELISA以高通量检测玉米粉中的AFB1。结果表明,在玉米粉基质中,该方法的IC50为0.1625 ng/m L,线性检测范围为0.0195-2.5 ng/m L(相当于玉米样品的0.2343-30μg/kg),玉米粉基质的线性拟合方程为Y=-0.4051X+0.2978(R~2adj=0.9821)。此外,该方法可以特异性识别AFB1,加标回收率为81.13%-96.94%,相对标准偏差均≤9.14%,在1份玉米粉标准物质(GBW(E)100386)和3份市售玉米粉实际样品的检测结果中,所建立的ELISA与HPLC具有高度的一致性。这些表明该方法灵敏度、特异性和准确性较高,可以满足玉米粉中AFB1的高通量检测。(3)基于间接信号放大策略的LFI快速定量检测FB1:为放大检测信号,保护单抗活性,提高检测结果准确性,以铕荧光纳米颗粒标记羊抗鼠Ig G以制备通用检测探针(羊抗鼠Ig G@Eu),在最优条件下,构建了基于间接信号放大策略的免疫层析试纸条检测玉米中的FB1。该方法可以特异性地识别FB1,在玉米中的检测限为0.025ng/m L(基于样品重量为0.50 ng/g),检测范围约为1-50 ng/m L(根据样品重量为20-1000 ng/g);加标回收率为82.50-115.08%,相对标准偏差≤6.06%。将其应用于玉米样品的实际检测中,所建立的方法与HPLC-MS/MS具有高度的一致性。这些表明该方法具有极高的灵敏度、良好的特异性、精确性和准确性,可以用于玉米中FB1的现场快速筛查。综上所述,以上研究为杂交瘤细胞筛选、单抗制备和抗原抗体的选择提供了一定的参考价值,所建立的ELISA和LFI在一定程度上可以克服市售产品的局限性,并满足玉米样品的现场高通量检测需求,这为构建其他免疫分析方法提供了一定的理论和实践支持。
其他文献
随着新课改的推行及落实,初中地理课堂教学效果所受到的重视程度也在不断地升高,怎样能够创建出一个更为有效、科学化的地理教学课堂十分重要。在实际教学实践时期,一些教师并没有对有效课堂构建的要点进行实践及探究,这就使得一些学生学习地理知识的兴趣及欲望比较薄弱,甚至还会拉低学生的课堂学习效果。所以,在基于初中地理中图版教材的基础上,研究新课改背景之下的初中地理有效课堂创建是十分必要的。接下来,我将针对新课
在当今经济全球化的影响下,人类所面临的决策环境越来越复杂,群决策作为一种可以有效集合群体智慧的决策理论,在政府和企业的决策过程中得到了越来越广泛的应用。在实际的群决策问题中,考虑到时间的紧迫性、可获取信息的模糊性、以及决策者知识有限等因素,之前对于决策信息的处理方式不再适用。为此,学者们提出了区间型模糊集和区间型模糊偏好关系,用来精确地刻画决策过程中的不确定性和模糊性,为决策者通过对方案的两两比较
在过去的几十年里,由于储氢材料作为一种高效、安全、绿色的能源载体,人们对其的兴趣正在稳步的增长。在众多的氢化物中,以镁为基础的储氢材料一直受到人们的广泛关注。其中Mg H2因为它较高的储氢容量(7.6 wt.%)和较低的生产成本具有较高的应用前景。然而,对于Mg H2储氢材料,材料本身合成的简便性、可逆性、相对较高的放氢温度(经过改善之后仍然高于200℃)和缓慢的动力学仍然是非常令人关注的问题,同
为适应社会经济的发展,我国财政部联合多部委推出《企业内部控制基本规范》及其三大配套指引,对国内上市公司的内控进行规范。毫无疑问,内部控制是公司开展经营的核心工作,对企业经营风险的防控、综合竞争力的提升和持续健康发展具有重要的作用。在我国经济迅速发展,经济体制深入改革的背景下,食品加工行业也得到了体量上的迅速扩张。但和体量扩张相对的是,食品行业的产品安全性等问题却频频发生,与和谐社会的建设难以匹配,
耕地与人类生存与发展密切相关,耕地资源事关国家粮食安全、农业可持续发展和文化传承,对于国家和社会的长久稳定有着重要意义。一方面,随着工业化、城镇化的发展和生态退耕工程的深入,我国建设用地和生态用地挤压耕地生存空间;另一方面农产品需求依旧要靠耕地实现。另外,我国耕地又存在着人均耕地少,后备资源不足、质量下降等多种问题。本文选取环渤海地区作为研究区,以Globe Land30地表覆盖数据为来源,结合G
含酚废水是一类典型的有机废水,处理此类废水的一种先进工艺是过硫酸盐氧化工艺。单靠过硫酸盐(PDS)本身是很难降解污染物,但是通过活化PDS可以产生活性自由基实现高效降解有机污染物。研究开发活化PDS的绿色催化剂是废水处理的关键问题。本论文设计非贵金属改性碳基催化剂和铈锰复合氧化物纳米催化剂这两种类型的绿色催化剂,以苯酚为目标污染物,开展污染物降解方面的相关研究。在非贵金属改性碳催化体系,针对材料的
随着气候的剧烈变化和人类活动的胁迫,我国不同类型生态功能区生态环境遭到严重破坏,生态脆弱性是当前区域环境变化和可持续发展研究的热点问题。然而当前的大多数研究方法适合单一类型的生态功能区,适用于多类型生态功能区的生态脆弱性研究相对较少。因此,本研究将针对三江源草原草甸湿地生态功能区、浑善达克沙漠化防治生态功能区、川滇森林及生物多样性生态功能区、桂黔滇喀斯特石漠化防治生态功能区,综合考虑每个生态功能区
由于传统化石燃料的短缺,能源问题仍是人类急需解决的问题。与传统二次电池相比,超级电容器具有高功率密度、较长的循环寿命、安全性好等优点,因此受到广泛研究者的关注。而超级电容器能量密度低的问题仍阻碍着电化学储能的发展。根据能量密度公式E=CcellV~2/2,由此可知,能量密度的大小与电极材料和电解质息息相关。本论文通过熔盐法、氟化石墨烯还原和模板法制备了三种不同的碳材料。通过各种材料表征,系统的分析
中国经济已由高速增长时期步入高质量增长时期,全要素生产率提升成为高质量发展的重要动力。随着我国人口红利逐渐消失、投资增速大幅下滑,劳动力、资本等要素投入增长逐渐放缓,农产品加工业依靠要素驱动的发展方式难以为继。因此,现阶段应转变为以全要素生产率的提高来推动农产品加工业的持续增长。党的十八大以来,行政审批制度改革成为政府实施行政体制改革的重要内容。其中涉及农产品加工企业的登记注册、厂房用地审批等行政
新时期以来,文学对人的关注更加深入,呼唤人的尊严、价值和权力,反思人的精神异化、人性撕裂和病态人格,成为重要的书写主题;疾病叙事因其具有复杂的情感指向、思想内涵和隐喻意味,有效地回应了对文革的反思,市场经济对人心人伦的冲击,以及世纪末的精神乱象;其中,精神病院叙事以精神病院、疯人院、精神病防治中心等类似空间为叙事载体,重点不是从医学视角探讨病理病情和治疗过程,而是追寻在时代与社会飞速前进浪潮中,当