鲤感染SVCV后Igs的表达及黏膜免疫反应分析

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鲤(Cyprinus carpio)是我国淡水鱼养殖的主要鱼种之一,是我国的主要经济食用鱼。然而随着快速发展起来的鲤养殖产业在带来经济发展的同时,也带来了严重的生态环境问题和其他方面的非协调发展。鲤病害的频繁爆发,也给养殖户带来了巨大的经济损失。其中,鲤春病毒血症是危害最为严重的疾病之一,但当下对鲤抗病毒感染的免疫相关研究比较匮乏。本研究对鲤免疫球蛋白Ig D重链基因进行克隆、鉴定与分析,构建了鲤免疫球蛋白基因的系统进化树;采用荧光定量PCR(q PCR)检测了鲤免疫球蛋白基因在不同组织中的表达水平;此外,我们成功构建了鲤春病毒血症病毒(SVCV)腹腔注射感染鲤的模型,检测了皮肤、鳃和肠道在SVCV感染前后的组织病理变化并探究了鲤免疫相关基因在感染SVCV后m RNA水平的表达情况。本试验主要的内容与结果如下所示:1.以NCBI上鲤转录组数据库为基础,克隆分析了鲤Ig D重链基因的c DNA全长序列。结果显示Ig D序列由2813 bp组成,包含一个2460 bp的开放阅读框,预测编码819个氨基酸。鲤Ig D重链基因由一个可变区(VH)、七个恒定区(CH1-CH7)和一个跨膜区(TM)组成。鲤免疫球蛋白系统进化树显示鲤Igs基因首先与团头鲂聚为一枝,之后与草鱼聚为一枝,揭示了鲤与鲤科鱼类具有非常近的亲缘关系。随后,检测了鲤Igs在多种组织中的m RNA表达水平,结果表明,鲤Ig D在系统组织中的表达较高。Ig M在头肾高表达,Ig Z1和Ig Z2在头肾和脾脏中高表达。2.成功构建了SVCV腹腔注射鲤的感染模型。结果显示鲤在受到SVCV感染后,皮肤和鳃发生了明显的形态变化,对照组相比,感染后1 d皮肤表皮层明显变薄;次级鳃片变短变粗,而肠道未见明显变化。3.SVCV感染后,鲤皮肤、鳃和肠道及脾脏组织中的许多免疫相关基因都不同程度地上调,尤其是抗病毒基因,在7天时达到峰值。更重要的是,我们研究了鲤Igs基因在感染SVCV后m RNA水平的表达情况。结果表明,鲤感染SVCV后,脾脏、鳃和皮肤中的Ig D表达显著增加,表明Ig D可能在系统组织和黏膜组织中都起作用。相反,Ig M仅在系统组织(脾脏)中表达出显著的上调,而在黏膜组织中则没有,这表明Ig M可能是系统免疫中主要的免疫球蛋白。对于Ig Z1和Ig Z2,在SVCV感染后的肠道中发现了高表达,这意味着它们在黏膜免疫中发挥了更重要的作用。然而,这些Igs各自的具体作用仍需进一步研究。
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