黄颡鱼作为重要的淡水经济鱼类,在我国的多个省份均有养殖,给我国水产养殖业带来巨大的经济效益。随着黄颡鱼养殖产业的规模逐渐扩大,细菌性疾病爆发的现象也愈发频繁,这严重威胁着我国黄颡鱼养殖产业的健康发展。同时世界各国均有报道使用疫苗可有效预防养殖过程中鱼类病害的发生。为此,本试验针对黄颡鱼的两个常见的主要病害菌,制备一种二联灭活疫苗,并采用浸泡的方式对黄颡鱼进行免疫接种。随后,通过检测免疫前后黄颡鱼免疫相关指标的变化情况,对二联灭活疫苗的免疫效果进行评估。我们利用福尔马林对鲶爱德华氏菌和维氏气单胞菌进行灭活处理,制成二联灭活疫苗。通过平板涂布实验和活体免疫浸泡实验对疫苗的安全性进行检测。结果显示:涂布的平板上未出现细菌的生长,经二联疫苗浸泡免疫的黄颡鱼鱼体没有出现明显症状,而两种未灭活的病原菌均可感染健康的黄颡鱼,还可观察到鱼体体表出现典型的临床症状,甚至出现鱼体死亡。这些结果表明二联灭活疫苗安全性良好,而活体病原菌作为免疫原也具有较高的感染力。为评估疫苗的免疫效果,我们对健康黄颡鱼进行浸泡免疫接种实验,免疫浓度为1.0×10~7cfu/m L。在免疫第1、3、7、14、28天后,取鳃组织和皮肤组织,用于组织切片观察其形态变化。采集血清、鳃黏液和皮肤黏液并对其酶活性、免疫相关基因表达水平以及抗体效价进行检测。结果发现,接种免疫后的鳃组织和皮肤组织中出现轻微的免疫反应,具体表现为皮肤表皮层增厚,黏液细胞数量增多,鳃组织的初级鳃丝变宽。酶活力检测结果显示,浸泡免疫后的血清、鳃黏液和皮肤黏液中,溶菌酶、补体C3和超氧化物歧化酶活力显著上升。在免疫相关基因表达水平的检测结果中发现Toll样受体基因表达上调。其中,在皮肤中的表达量最高,其次是在脾脏组织中。免疫后的14天内,脾脏、鳃和皮肤中的C-型凝集素基因表达显著上调,在鳃组织中的变化最为迅速,免疫的第1天就达到峰值,而脾脏和皮肤组织中的表达量峰值出现在免疫后的第14天。IL-1β基因在黏膜组织和系统组织中的表达量均有升高,其中鳃和皮肤两个黏膜组织中的IL-1β在免疫第1天就显著升高。以维氏气单胞菌作为免疫原时,结果发现血清和鳃黏液在免疫后第7天就可以检测到抗体效价,持续上升并在免疫后第28天达到峰值。皮肤黏液中的抗体效价只在第14天和28天检测到。以鲶爱德华氏菌作为免疫原时,血清、鳃黏液和皮肤黏液中的抗体效价在免疫第7天、14天和28天均可检测到,其中,血清和皮肤中的抗体效价在第14天达到最高,鳃黏液中的抗体效价最高值出现在第28天。在浸泡接种28天后,进行攻毒感染实验。统计结果显示,二联灭活疫苗对A.veronii和E.ictaluri的相对免疫保护率分别为71.11%、69.17%。这些结果表明,黄颡鱼浸泡接种二联灭活疫苗后,可以提高机体的免疫能力,增强对维氏气单胞菌和鲶爱德华氏菌的抵抗作用。