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巨噬细胞是重要的免疫细胞,巨噬细胞集落刺激因子（CSF-1）是巨噬细胞存活、增殖和分化的关键调控因子。本研究通过团头鲂巨噬细胞集落刺激因子（MaCSF-1）及其受体（MaCSF-1R）基因克隆、原核蛋白表达与特异性抗体制备,研究了MaCSF-1对团头鲂头肾单核/巨噬细胞增殖、吞噬、炎症因子分泌的影响以及其作用机制。主要的研究结果如下:1、MaCSF-1和MaCSF-1R基因克隆和分子特性MaCSF-1 cDNA全长（MW805228）含有1626个核苷酸（nts）,蛋白前体分子量（MW）为60.3 k Da,等电点（p I）为9.03。与哺乳动物和其它已报道硬骨鱼类的CSF-1类似,MaCSF-1包含一个信号肽（位于aa位置1-28）、一个CSF-1结构域（位于aa位置36-177）、两个低复杂性结构域（位于aa位置201-214和222-233）和一个短跨膜结构域（位于aa位置499-521）,具有四个高度保守的半胱氨酸残基。通过氨基酸序列比对,发现MaCSF-1与其它已报道硬骨鱼类以及哺乳动物的CSF-1具有很高的同源性,其中与草鱼同源性最高达94.83%。MaCSF-1R cDNA全长（MW805230）含有2931个核苷酸（nts）,蛋白前体分子量（MW）为110 k Da,等电点（p I）为5.84。除了少一个IgG样结构域外,MaCSF-1R与哺乳动物和其它已报道硬骨鱼类的CSF-1R类似,包括一个信号肽（位于aa位置1-17）、4个IgG样结构域（位于aa位置32-110,122-205,224-295和325-412）、一个短跨膜结构域和一个胞浆酪氨酸激酶结构域。通过氨基酸序列比对,发现MaCSF-1R与其它硬骨鱼类以及哺乳动物具有很高的同源性,其中与草鱼同源性最高达96.62%。q RT-PCR和WB结果表明正常生理状态下,MaCSF-1在脾脏中表达量最高、血液次之、随后依次是头肾、肌肉、肝脏、大脑、心脏、肠道、鳃。MaCSF-1R在脾脏中表达量最高、头肾次之、随后依次是血液、肝脏、肌肉、肠道、大脑、心脏、鳃。2、MaCSF-1激活单核/巨噬细胞MaCSF-1具有激活团头鲂头肾单核/巨噬细胞的生物活性。CCK-8细胞增殖测量法结果显示,在300 ng/m L rMaCSF-1作用2 h后与对照组相比增殖率达11.1%;流式细胞术结果显示,300 ng/m L rMaCSF-1刺激4 h后与对照组相比吞噬率提高30%以上;q RT-PCR结果显示,300 ng/m L rMaCSF-1作用后炎症因子IL-10在4 h显著上升,是对照组PBS的6.4倍。3、MaCSF-1通过与MaCSF-1R结合从而激活单核/巨噬细胞间接免疫荧光结果显示MaCSF-1R定位在巨噬细胞膜上。MaCSF-1R特异性抗体阻断后,与对照组相比MaCSF-1刺激单核/巨噬细胞增殖、促进吞噬以及炎症因子IL-10的表达明显受到抑制;pull-down试验结果证明rMaCSF-1与rMaCSF-1R结合,间接免疫荧光结果也证明MaCSF-1与MaCSF-1R在巨噬细胞上结合。4、MaCSF-1R可以作为单核/巨噬细胞表面分子标记,MaCSF-1R Ab或可用于分选单核/巨噬细胞根据已有研究报道,选取MaCSF-1R、CD11b,CD4、CD8、TCRβ,IgM、IgD,MPX作为细胞表面分子标记分别鉴定团头鲂单核/巨噬细胞,T细胞、B细胞、中性粒细胞。PCR半定量结果显示,新鲜分离的头肾单细胞悬液中CD4、CD8、TCRβ,IgM、IgD条带明亮,其次是MaCSF-1R、CD11b,最后是MPX,说明新鲜分离的头肾单细胞悬液中T细胞和B细胞占比最高、单核/巨噬细胞其次、最后是中性粒细胞。而经过3 d贴壁纯化培养后的细胞中,MaCSF-1R、CD11b明亮、MPX条带很微弱、CD4、CD8、TCRβ,IgM、IgD条带基本消失。利用MaCSF-1R Ab标记单核/巨噬细胞,流式细胞术结果显示MaCSF-1R Ab标记阳性率达10%以上。由此说明,纯化培养后可得到较高纯度巨噬细胞,MaCSF-1R可以作为单核/巨噬细胞表面分子标记,MaCSF-1R Ab具有一定的分选单核/巨噬细胞的能力。5、rMaCSF-1作用下单核/巨噬细胞可传代培养原代分离的头肾单核/巨噬细胞在添加rMaCSF-1后可进行2代的传代培养。培养过程中发现,添加rMaCSF-1后细胞具有良好贴壁效果,以贴壁细胞为核心较容易形成集落,并不断扩大。综上所述,MaCSF-1具有促进巨噬细胞增殖、吞噬和分泌细胞因子的生物活性,MaCSF-1R介导MaCSF-1激活巨噬细胞。此外,MaCSF-1R可作为单核/巨噬细胞特异性标记,并应用于单核/巨噬细胞的分选。该研究为硬骨鱼中MaCSF-1和MaCSF-1R的生物学活性及其关系提供了更完善的认识。