化脓隐秘杆菌病是由化脓隐秘杆菌（Trueperella pyogenes,T.pyogenes）引起的一种人畜共患病。T.pyogenes是多种动物的共生菌,普遍存在于牛、羊、猪等一些重要经济动物体内,常寄居于健康动物的乳房、泌尿生殖道、呼吸道和胃肠道黏膜,在动物免疫系统功能受到抑制的情况下,可感染动物,导致动物皮肤、内脏器官及关节的非特异性化脓性炎症。由于缺乏针对T.pyogenes感染的疫苗,目前该疾病的预防和治疗主要依赖于抗生素。考虑到我国目前严格限制兽用抗生素的使用,T.pyogenes病预防手段的研发仍是需要解决的问题。本研究首先克隆了T.pyogenes氯化血红素结合蛋白（HtaA）的编码基因htaA。将htaA基因分节段后,在大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）表达系统中表达了重组HtaA-2（151-1033aa）蛋白（recombinant HtaA-2,rHtaA-2）。同时,本研究将实验室构建的编码T.pyogenes溶血素蛋白（pyolysin,PLO）突变体的pET-30a（+）-PLO W497F质粒以及编码T.pyogenes菌毛蛋白FimE的pET-30a（+）-FimE质粒转化E.coli感受态细胞,表达了rPLO W497F和rFimE蛋白。rHtaA-2、rPLO W497F和rFimE经亲和层析纯化后,组成多种免疫原组合,与氢氧化铝胶混合并免疫小鼠。用q RT-PCR方法对小鼠免疫后肺、肝和脾脏中细胞因子mRNA的含量进行检测,结果表明,所有抗原组合免疫后,IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α和IL-10基因的转录水平均有上升,其中肝脏细胞因子转录水平上升最明显,细菌攻击后,各组织中细胞因子转录水平进一步提升。小鼠经三次免疫后,用T.pyogenes（2×10~9CFU/只）经腹腔攻击小鼠,结果表明抗原组合中包含rFimE的疫苗无法提供对T.pyogenes攻击完全的免疫保护,表明rFimE不适合作为T.pyogenes疫苗的备选抗原;而rHtaA-2和rPLO W497F诱导产生的抗体能够为小鼠提供完全的免疫保护。组织病理学观察结果表明,未免疫小鼠经细菌致死性攻击后,肺脏和肾脏有明显的损伤,而免疫组小鼠的肺脏和肾脏损伤情况与未免疫小鼠相比有不同程度的减轻。用ELISA方法检测各组小鼠血清中抗HtaA、PLO和FimE特异性抗体的水平,结果表明,经两次接种后,相应的特异性抗体水平显著升高。混合抗原在诱导特异性抗体产生方面效果优于单独使用一种抗原免疫。溶血抑制实验表明,与rPLO W497F单独作为免疫原相比,用包含rPLO W497F的混合抗原,诱导产生的溶血抑制性抗体水平更高。试管凝集实验结果表明rHtaA诱导产生的抗体,能够更有效地使T.pyogenes凝集。综上,本研究以重组表达的HtaA、PLO和FimE蛋白制备了针对T.pyogenes感染的多种抗原组合,并以小鼠为模型对各抗原组合的安全性、免疫原性和免疫保护效果进行了评价,为T.pyogenes病的预防提供了参考数据,为T.pyogenes感染的防控工作提供了可供选择的手段。